人關節軟骨細胞培養

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人關節軟骨細胞【Human Bone: Articular Chondrocytes】
      產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
   建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
   如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

ANP32C 致瘤磷蛋白32相關蛋白1抗體  威爾氏李斯特菌
Adenosine deaminase 腺苷脫氨酶抗體  比基尼鏈霉菌
ASB4 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族4抗體  磚紅鏈霉菌
ATRNL1 ATRNL1蛋白抗體  粗糙鏈孢霉
AFP4a AFP4a蛋白抗體  產朊假絲酵母
APBB2 鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體  紅法夫酵母
APBB3 鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體  阿舒多囊霉
APPBP2 β淀粉樣蛋白前體蛋白結合蛋白2抗體  異型酒香酵母
Aph-1b 早老素穩定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體  乙型溶血性鏈球菌
phospho-AKT1 (Tyr474) 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 
phospho-AKT1 (Ser473 + Tyr474) 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體  福氏志賀氏菌
ASH1L ASH1L蛋白抗體  痢疾志賀氏菌
ADRA2C α2C-AR腎上腺素能受體抗體
AZI1 中心體蛋白AZI1抗體  陰溝腸桿菌
ALPK3 α蛋白激酶3抗體（心肌）  冰核細菌
ALOXE3 表皮型脂氧合酶3抗體（魚鱗病相關蛋白）  大豆根瘤菌
ANKRD28 錨蛋白重復域28抗體  費氏志賀氏菌
AFF4 淋巴細胞相關AF4樣蛋白抗體  英諾克李斯特菌
ANKRD12 錨蛋白重復結構域蛋白12抗體  單增李斯特菌
ANKRD13A 錨蛋白重復結構域蛋白13A抗體  藤黃微球菌
ANKRD9 錨蛋白重復結構域蛋白9抗體  
ANKS1A 錨蛋白重復及SAM結構域蛋白1A抗體  綠膿假單胞菌(綠膿桿菌)
APM2 脂肪特定轉錄因子2抗體  停乳鏈球菌
APOL3 載脂蛋白L3抗體  豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種
ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 腫瘤/抗原81抗體  痤瘡丙酸桿菌
ATXN7L2 共濟失調蛋白7樣2抗體  金針菇
ARS2 鹽耐藥蛋白ARS2抗體  立枯多核菌
ARSA 芳香基硫酸酯酶1抗體  普雷恩毛霉
ASNA1 鹽轉運三磷酸腺苷酶抗體  雅致放射毛霉＝葡匐放射毛霉
ATXN7L1 共濟失調蛋白7樣1抗體  嬰兒雙歧桿菌
AUTS2 孤獨癥易感基因2蛋白抗體（自閉癥相關蛋白1）  普通變形桿菌
ATX2 脊髓小腦共濟失調2型蛋白抗體  熱帶靈芝

小鼠雙鏈DNA(mouse dsDNA) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠多巴胺(mouse Dopamine) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠二胺氧化酶(mouse DAO) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠D-二聚體(mouse D-Dimer) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠β內啡肽(mouse β-EP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠表皮生長因子(mouse EGF) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠表皮生長因子受體(mouse EGF R) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠內皮素-1(mouse Endothelin-1) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠噬酸性粒細胞趨化因子(mouse Eotaxin) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠促紅細胞生成素(mouse EPO) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠紅細胞生成素受體(mouse EPOR) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(mouse ECP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠上皮中性粒細胞活化肽-78(mouse ENA-78) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠血管內皮抑素(mouse Endostatin) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠腎上腺素(mouse EPI) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠內皮細胞一氧化氮合酶(mouse eNOS) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠雌二醇(mouse E2) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠促卵泡素(mouse FSH) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠凋亡相關因子(mouse Fas) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠凋亡相關因子配體(mouse Fas Ligand) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠酸性成纖維生長因子(mouse a-FGF) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠堿性成纖維生長因子(mouse b-FGF/FGF-2) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin） ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Flt3(mouse Flt3) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Flt3配體(mouse Flt3 Ligand) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠纖維連結蛋白(mous FN) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine） ELISA 48T/96T 進口分裝
人關節軟骨細胞培養小鼠纖維蛋白原(mouse Fibrinogen) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Foxp3(mouse Foxp3) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠胃泌素(mouse Gastrin) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠胰高血糖素樣肽-1(mouse GLP-1) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon) ELISA 48T/96T 進口分裝

注意事項：
1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。