人成骨細(xì)胞說明書

人成骨細(xì)胞【Human Bone: Normal Osteoblasts】
      產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗體  棉花立枯菌
phospho-ATF2(Ser472) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體  白色假絲酵母
3-Apr 凋亡相關(guān)蛋白3抗體 
ATG18 自噬相關(guān)蛋白18抗體  阪崎腸桿菌
ATG4A 自噬相關(guān)蛋白4A抗體  清酒乳桿菌清酒亞種
APOA4 載脂蛋白A4抗體  大豆慢生根瘤菌
ALOX12 12脂氧合酶抗體  樹狀微桿菌
Angiotensin III 血管緊張素III抗體  蛾微桿菌
ADCY3 腺苷酸環(huán)化酶3抗體  青春雙歧桿菌
Angiomotin 血管動(dòng)蛋白抗體  串珠鐮孢
Adenovirus 5 E1A 腺病毒早期E1A蛋白抗體  玖紅穗狀霉
phospho-ATF2 (Ser44) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體  構(gòu)巢裸胞殼
phospho-ATF2 (Ser94) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體  雜色曲霉
phospho-ATXN1(Thr236) 磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體  亞麻刺盤孢
ANKRD17 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體  休哈塔假絲酵母
ALDH1A1 胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體  魯氏接合酵母
ARL3 ADP核糖基化樣因子ARL3抗體  莫格球擬酵母
15 Lipoxygenase 1 花生四烯酸15脂氧合酶1抗體  放射性根瘤菌
ABC2 癌增強(qiáng)蛋白2抗體  褐球固氮菌
Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗體  假結(jié)核耶爾森氏菌
Alpha B Crystallin α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體  小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌
ADORA2B 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體  酪丁酸梭菌
ARK5 AMPK的相關(guān)蛋白激酶5抗體  白色葡萄球菌

小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CXCL1/KC(mouse KC) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠環(huán)磷酸鳥苷(mouse cGMP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(mouse CNTF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠CD34(mouse CD34) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(mouse sCD40L) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠補(bǔ)體C3a(mouse C3a) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
人成骨細(xì)胞說明書小鼠補(bǔ)體C5a(mouse C5a) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血清總補(bǔ)體(mouse CH50) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠肌酸激酶(mouse CK) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝