人成骨細胞說明書

人成骨細胞【Human Bone: Normal Osteoblasts】
      產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗體  棉花立枯菌
phospho-ATF2(Ser472) 磷酸化活化復制因子2抗體  白色假絲酵母
3-Apr 凋亡相關蛋白3抗體 
ATG18 自噬相關蛋白18抗體  阪崎腸桿菌
ATG4A 自噬相關蛋白4A抗體  清酒乳桿菌清酒亞種
APOA4 載脂蛋白A4抗體  大豆慢生根瘤菌
ALOX12 12脂氧合酶抗體  樹狀微桿菌
Angiotensin III 血管緊張素III抗體  蛾微桿菌
ADCY3 腺苷酸環(huán)化酶3抗體  青春雙歧桿菌
Angiomotin 血管動蛋白抗體  串珠鐮孢
Adenovirus 5 E1A 腺病毒早期E1A蛋白抗體  玖紅穗狀霉
phospho-ATF2 (Ser44) 磷酸化活化復制因子2抗體  構巢裸胞殼
phospho-ATF2 (Ser94) 磷酸化活化復制因子2抗體  雜色曲霉
phospho-ATXN1(Thr236) 磷酸化失調癥蛋白1抗體  亞麻刺盤孢
ANKRD17 錨蛋白重復結構域蛋白17抗體  休哈塔假絲酵母
ALDH1A1 胞質乙醛脫氫酶1抗體  魯氏接合酵母
ARL3 ADP核糖基化樣因子ARL3抗體  莫格球擬酵母
15 Lipoxygenase 1 花生四烯酸15脂氧合酶1抗體  放射性根瘤菌
ABC2 癌增強蛋白2抗體  褐球固氮菌
Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗體  假結核耶爾森氏菌
Alpha B Crystallin α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體  小腸結腸炎耶爾森氏菌
ADORA2B 腺苷A2b受體/神經生長因子1受體抗體  酪丁酸梭菌
ARK5 AMPK的相關蛋白激酶5抗體  白色葡萄球菌

小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CXCL1/KC(mouse KC) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠環(huán)磷酸鳥苷(mouse cGMP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠睫狀神經營養(yǎng)因子(mouse CNTF) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CD34(mouse CD34) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(mouse sCD40L) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠補體C3a(mouse C3a) ELISA 48T/96T 進口分裝
人成骨細胞說明書小鼠補體C5a(mouse C5a) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠血清總補體(mouse CH50) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠肌酸激酶(mouse CK) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB) ELISA 48T/96T 進口分裝