質粒名稱:pHyVec4 質粒規格:2ug 實驗步驟: 1)質粒提取 1.10,0001min離心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml離心管中 2.加入100溶液1,振蕩至*懸浮 3.加入200溶液2,立即輕柔顛側離心管6次,使菌體充分裂解,隨后將離心管冰上放置 3分鐘 4.加入150山溶液3,立即溫和顛倒離心管數次,冰上放置3分鐘,10,00g離心10mins 5.將步驟4的上清轉移至新的離心管(盡量去除雜質),加入等體積的/氖仿/異成醇混 合均勻10,000離心5min 將步驟5的上清轉移至新的離心管,加入2倍體積的無水乙醇,室溫放置5-1omin,沉 降DNA 7.10000g離心10分鐘,棄乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗滌沉淀,10,000離 心5分鐘 8.倒掉乙醇溶液,用吸水紙吸凈管壁上的水珠,室溫蒸發痕量乙醇 9.加入適量含 Rnase的TE或滅菌雙蒸水溶解質粒DNA 2)質粒鑒定瓊脂糖礙膠電泳 灌膠:膠中加入芡光染料< SYBR Green) 加樣:質粒+上樣緩沖液→混勻 電泳 結果觀察:UV燈下 pHyVec4實驗分析: 裂解細胞中除含有質粒DNA外,還含有基因組DNA、各種RNA、蛋白質和脂類等物質,因 用堿裂解法除去雜質 1、防止DNA裂解: Solution1 1)、所含糖增加溶洨黏度,維持滲透壓,防止DNA受機械剪切作用降解 2)、所含EDTA抑制酶活性 2、溶解與變性: Solution2 1)強堿使質粒DNA和染色體DNA變性 100343-200201 鹽酸妥拉唑林 含量測定 50mg 100344-200001 鹽酸硫利達嗪 鑒別用 50mg 100345-200301 鹽酸卡替洛爾 含量測定 75mg 100348-200301 7-甲氧基-4’-羥基異黃酮 有關物質 20mg
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