雞IgYelisa檢測(cè)試劑盒多少錢(qián)IgY ELISA KiT 產(chǎn)品名稱 | 雞IgYelisa檢測(cè)試劑盒多少錢(qián) | 英文名稱 | IgY ELISA KiT | 規(guī)格 | 48T/96T |
雞IgYelisa檢測(cè)試劑盒多少錢(qián)IgY ELISA KiT【實(shí)驗(yàn)用途】IgY,由兩條重鏈(H)和輕鏈(L)組成,重鏈(υ)由一個(gè)可變區(qū)(V)和4個(gè)恒定區(qū)(C)組成,沒(méi)有鉸鏈結(jié)構(gòu)。完整分子量為180KDa(7.8S),重鏈為 67-70KDa,輕鏈為25KDa,但還存在一個(gè)小體積副本,120KDa(5.7S),發(fā)現(xiàn)于野鴨和某些龜類中。克隆IgY H鏈表明,較小的IgY H鏈缺乏C3、C4區(qū),由于使用了特異的末端外顯子(位于C2和C3恒定區(qū)外顯子間的內(nèi)含子中),5.7S的IgY的H鏈僅有兩個(gè)C區(qū),實(shí)際與7.8S IgY的H鏈CH1和CH2相*。5.7S IgY與F(ab`)2片段十分相似,因此正確名稱為IgY(△Fc),其H鏈為υ(△Fc)。7.8S IgY和5.7S IgY(△Fc)可共存于同一種動(dòng)物或單獨(dú)存在:鴨和鵝都有全長(zhǎng)和截短的IgY,雞和火雞僅有全體積的IgY分子。比較IgG和IgY的恒定區(qū)發(fā)現(xiàn),IgG的Cγ2、Cγ3與IgY的Cυ3、Cυ4極相似,而Cυ2可能經(jīng)“壓縮”形成IgG的鉸鏈結(jié)構(gòu),鉸鏈結(jié)構(gòu)是哺乳動(dòng)物抗體的*結(jié)構(gòu)。在IgY分子結(jié)構(gòu)上的Cυ1-Cυ2和Cυ2-Cυ3間存在脯氨酸、甘氨酸殘基,這些區(qū)域?yàn)镮gY分子提供了一定的擺動(dòng)性。所提供的ELISA Kit是典型的競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為抗雞IgY抗體,檢測(cè)相為HRP標(biāo)記雞IgY。樣品和HRP標(biāo)記雞IgY同時(shí)加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)蛋白呈反相關(guān)。。 試劑配制: 1、雞IgYelisa檢測(cè)試劑盒多少錢(qián)酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。 2、標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。 3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6、生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 樣本處理及要求: 1.雞IgYelisa檢測(cè)試劑盒多少錢(qián)血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。 仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
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