小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物【Mouse Brain: Normal Nerve Microglia Derivatives】

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物是從小鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取的，小鼠原代神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

金黃色葡萄球菌 GIM1.142=ATCC65381mlAdefovir69415阿德福韋

卵圓形馬拉色菌ATCC443441mlAdefovir dipivoxil14239阿德福韋酯

枯草芽孢桿菌DB1mlAcyclovir592779阿昔洛韋

枯草芽孢桿菌DB01mlAcid Black 1648酸性黑 1

枯草芽孢桿菌DC1mlAcetylatractylodinol615829乙酰蒼術(shù)素醇
humanperoxisomeproliferativeactivatedreceptorgamacoactivator1alpha,PPARGC1ELISAKit人過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,3-Bis(4,5-dihydro-2-oxazolyl)benzene  34052-90-9  中文名：1,3-雙(4,5-二氫-2-惡唑)苯  分子式：C12H12N2O2 

Humanpermeabilityglycoprotein,P-gpELISAKit人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,2-Cyclohexanedicarboximide  中文名：  分子式：O2 

HumanPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,2-Bis(phenylthio)ethane  622-20-8  中文名：1,2-雙(苯硫基)乙烷  分子式：C14H14S2 

HumanPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  2-(Phenylmethoxy)-naphthalene  613-62-7  中文名：2-萘酚芐基醚  分子式：C17H14O  度：98.0%   

HumanPerforin/Pore-formingprotein，PF/PFPELISAKit人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,2-Benzisothiazolin-3-one  中文名：1,2-苯并異噻唑-3-酮  分子式：C7H5NOS
五味子乙素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Schizandrin B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠己糖激酶1(HK1)ELISA試劑盒 ，英文名： HK1 ELISA Kit

五味子酯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)  Schisantherin A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲基CpG結(jié)合蛋白2(MECP2)ELISA試劑盒 ，英文名： MECP2 ELISA Kit

西貝母堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Sipeimine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseMethylaseELISAKit 96T/48T

西紅花苷，α-藏花素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Crocin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒 ，英文名： Methylase ELISA Kit

西紅花苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）  Crocin I  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲胎蛋白(αFP)ELISA試劑盒 ，英文名： αFP ELISA Kit

西紅花苷II（標(biāo)準(zhǔn)品）  Crocin II  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲腺原酸脫酶Ⅱ(DIO2)ELISA試劑盒 ，英文名： DIO2 ELISA Kit

細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tenuifolin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲腺原酸脫酶Ⅲ(DIO3)ELISA試劑盒 ，英文名： DIO3 ELISA Kit

仙鶴草酚B（標(biāo)準(zhǔn)品）  Agrimol B  質(zhì)量規(guī)格：TLC鑒別用 小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

血根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Sanguinarine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒 ，英文名： AFP ELISA Kit

香草酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  Vanillic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物人 Apelin(Apelin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Ampicillin Trihydrate  中文名：氨芐西林三水酸  分子式：C16H19N3O4S  度：98.0%

熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒     3-Hydroxycatalponol  中文名：  分子式：C15H18O3  度：97.0%

熱休克蛋白70   英文名稱(chēng)：   Heat shock protein 70   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HSP70  Palmitone  502-73-8  中文名：棕櫚酮  分子式：C31H62O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

熱休克蛋白27   英文名稱(chēng)：   Heat shock protein 27   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HSP27  Palmitone  中文名：棕櫚酮  分子式：C31H62O 

熱休克蛋白 70(HSP70)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Panaxydiol  63910-76-9  中文名：  分子式：C17H24O2  度：%  關(guān)鍵詞：

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。