人腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養(yǎng)

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人腦靜脈血管平滑肌細胞提取物【Human Brain Venous: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】

人腦靜脈血管平滑肌細胞提取物是從人原代腦靜脈血管平滑肌細胞提取的，人原代腦靜脈血管平滑肌細胞從正常人腦靜脈血管平滑肌組織制備。正常人腦靜脈血管平滑肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

舒巴坦快速檢測卡1,2-Benzanthraquinone249861,2-苯并奎寧酮

硫酸鈉快速檢測卡9-Anthracenecarboxylic acid72329-蒽甲酸

雌二醇類快速檢測試劑條Artemether719637蒿

雌三醇快速檢測試劑條Anthraquinone-carboxylic acid1178蒽醌-羧酸

克倫特羅Elisa檢測試劑盒962-(Cyanomethyl)benzimidazole441482-甲基苯并咪唑
N6-Benzoyladenine  4005-49-6  中文名：N6-苯甲酰基腺嘌呤  分子式：C12H9N5O  度：98.0%      小鼠細胞膜表面球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒  

N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine  64325-78-6  中文名：N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷  分子式：C38H35N5O6  度：98.0%      小鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒           

N4-Benzoylcytosine  26661-13-2  中文名：N4-苯甲酰基胞嘧啶  分子式：C11H9N3O2  度：98.0%      小鼠細胞色素P450(mouse Cytochrome P450)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

N4-Benzoylcytidine  13089-48-0  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6  度：98.0%      小鼠C反應蛋白(mouse CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

N4-Benzoyl-2'-deoxycytidine  4836-13-9  中文名：N4-苯甲酰基-2'-脫氧胞苷  分子式：C16H17N3O5  度：98.0%      小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝
胰酶(1:4500)  Pancreatin  質量規(guī)格：酶活1:4500,BR 人促甲狀腺素受體(TSHR)抗體試劑盒 Human TSHR aibody ELISA Kit

枸櫞酸奧芬那君;枸酸芬那君  Orphenadrine   質量規(guī)格：>98%,BR 人促甲狀腺素受體(TSHR)試劑盒 Human TSHR ELISA Kit

β-半乳糖苷酶  β-Galactosidase  質量規(guī)格：700u/mg，羅氏分裝 人促卵泡素(FSH)試劑盒 human follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit

脫落酸(標準品)  Abscisic acid,S-ABA  質量規(guī)格：98%,標準品 人促凝素(CP)試劑盒 Human Cancer Procoagula,CP ELISA Kit

脫落酸(高)  Abscisic acid,S-ABA  質量規(guī)格：98%,BR 人促腎上皮質激素釋放激素(CRH)試劑盒 human coicoopin releasing hormone,CRH ELISA Kit

脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈  Abscisic acid,S-ABA  質量規(guī)格：95%,BR 人促腎上腺皮質激素(ACTH)試劑盒 Human adrenocoicoopic hormone,ACTH ELISA kit

胃蛋白酶(1:3000)  PEPSIN  質量規(guī)格：1:3000,BR 人促生長激素釋放激素(GHRH)試劑盒 Human growth hormone releasing hormone,GHRH ELISA Kit

核糖核酸酶A(sigma)  Ribonuclease A from bovine pancreas  質量規(guī)格：≥50 U/mg,sigma 原裝 人促睡眠肽(DSIP)ELISA檢測試劑盒Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit 96T/48T

S-4  Andarine  質量規(guī)格：>98% 人促睡眠肽(DSIP)試劑盒 Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA Kit

胃蛋白酶(1:12000)  PEPSIN  質量規(guī)格：1:12000,BR 人促胃液素受體(GsaR)ELISA檢測試劑盒Humangasieceptor,GsaRELISAKit 96T/48T
人腦靜脈血管平滑肌細胞提取物培養(yǎng)Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  23454-33-3  中文名：群勃龍環(huán)己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠降鈣素(CT)ELISAKit  

Trenbolone acetate  10161-34-9  中文名：  分子式：C20H24O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠脫氫表雄酯(DHEA-S)ELISAKit              

Trenbolone  10161-33-8  中文名：群勃龍  分子式：C18H22O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠孕   英文名稱：   Progesterone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PROG

Trehalose  99-20-7  中文名：海藻糖  分子式：C12H22O11  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠1型前膠原羧基端原肽   英文名稱：   Mouse C-Terminal Propeptide of type I collagen    規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PICP

Trazodone hydrochloride  25332-39-2  中文名：鹽酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠甲狀旁腺激素   英文名稱：   Mouse Parathormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PTH

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。