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PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒

PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒
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公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng),PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒質(zhì)量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
  PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒的詳細資料:

PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒

總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒

 

EYX99556

 

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。

細胞培養(yǎng)方法;
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項;

1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項;

1. 接收到,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 

犬維生素K1(VK1)試劑盒 Canine Vitamin K1,VK1 ELISA Kit  39012-20-9胡黃連苷II說明書  Picroside II

英文名稱HumanansformingGrowthfactorβ1ELISAkit人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)規(guī)格:96T/48T  64461-95-6胡黃連苷III品牌  Picroside III

超氧化物歧化酶(SOD)紅細胞裂解樣品制備試劑盒50  94-62-2胡椒堿規(guī)格  Piperine

RatGonadoopin-releasinghormonereceptor,GHRELISA試劑盒大鼠促性腺激素釋放激素受體(GHR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  38226-86-7脫水羊藿素  Anhydroicaritin

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-β3 ELISA Kit  474-58-8胡蘿卜苷說明書  Daucosterol
5986-55-0百秋李醇說明書  Patchouli alcohol    豬粘膜血管地址素細胞黏附分子1(MADCAM1)試劑盒 Pig mucosal vascular addressin cell adhesion molecule 1,MADCAM1 ELISA kit

5957--80-2鼠尾草酚品牌  Carnosol  豬粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)試劑盒 Pig mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA Kit

5945-50-6水晶蘭苷說明書  Monotropein  豬粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)試劑盒 Pig mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit

5945-50-6水晶蘭苷品牌  Monotropein  豬粘蛋白/粘液素2(MUC2)試劑盒 Pig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit

5940-00-1豯薟精醇規(guī)格  Darutigenol  豬粘蛋白/粘液素1(MUC1)試劑盒 Pig Mucin-1,MUC1 ELISA Kit
化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達載體(pcDNA-AM)測序引物對2OD  3650--09-7鼠尾草酸規(guī)格  Carnosic acid

RatHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISA試劑盒大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  19057-60-4薯蕷皂苷  Dioscin

小鼠脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 ,英文名: FABP4 ELISA Kit  512-04-9薯蕷皂苷元說明書  Diosgenin

犬白細胞分化抗原8(CD8)ELISA檢測試劑盒Canineclusterofdiffereiation8,CD8ELISAKit 96T/48T  33171-05-0雙去氧基姜黃素品牌  Bisdemethoxycurcumin

犬前列腺素E2(PGE2)試劑盒 Canine Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit  22888-70-6水飛薊賓規(guī)格  Silymarin
PrimaCell™人直腸成纖維細胞試劑盒26339-90-2七葉皂苷B品牌  Escin IB   英文名稱RatTG-AbELISAKit大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

26116-89-2鬧羊花II說明書  Rhodojaponin-II  英文名稱RatTG-AbELISAKit大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

26116-89-2鬧羊花II品牌  Rhodojaponin-II  英文名稱RatTestoteroneELISAKit大鼠睪同(Testoterone)ELISAKit規(guī)格:96T/48T

26116-89-2鬧羊花II  Rhodojaponin-II   英文名稱RatTestoteroneELISAKit大鼠睪同(Testoterone)ELISAKit規(guī)格:96T/48T

26091-79-2白當(dāng)歸腦品牌  Byakangelicol   英文名稱RatTATELISAKit大鼠凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物(TAT)規(guī)格:96T/48T

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 人直腸成纖維 細胞試劑盒
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