PrimaCell™人少突膠質前體細胞試劑盒培養

PrimaCell™人少突膠質前體細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

Ratgonadoopin-releasinghormone,GHELISA試劑盒大鼠促性腺激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒規格：96T/48T  槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷  Quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden

小鼠轉化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β2 ELISA Kit  117-39-5槲皮素說明書  Quercetin

小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISA檢測試劑盒Mousethyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit 96T/48T  27208-80-6虎杖苷品牌  Polydatin

人抗UACA抗體(IgG)試劑盒 Human ai-UACA aibody IgG ELISA Kit  2009-24-7花椒毒酚規格  Xanthotol

RabbitVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKit兔血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒規格：96T/48T  298-81-7花椒  8-Methoxypsoralen
58546-55-7五味子酯乙  schisantherin B  豬誘導型合成酶(iNOS)試劑盒 Pig inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA Kit

58546-54-6五味子醇乙規格  Schisandrol B   豬游離脂肪酸(FFA)試劑盒 Pig free fatty acids,FFA ELISA Kit

58546-54-6五味子醇乙規格  Schisandrol B  豬游離*狀腺原氨酸(Free-T3)試劑盒 Pig free i-iodothyronine indes,FT3 ELISA kit

58546-34-2葫蘆素IIA說明書  Cucurbitacin IIA    豬游離甲狀腺素(FT4)試劑盒 Pig free thyroxine,FT4 ELISA kit

58543-16-1萊苞迪苷A  Rebaudioside A  豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)試劑盒 Porcine AChRab ELISA Kit
化線粒體NADH氧化酶活性定量檢測試劑盒20  麥冬皂苷O-4規格  glycoside O-4

RatInsulin,INSELISA試劑盒大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒規格：96T/48T  1111088-89-114α-羥基SprengerininC  14α-hydroxy Sprengerinin C

小鼠再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)ELISA試劑盒 ，英文名： REG1β ELISA Kit  去乙酰基OphiopojaponinA說明書  deacetyl ophiopojaponin A

猴可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測試劑盒MonkeySolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 96T/48T  薯蕷皂苷元-3-O-β-D-木糖-(1→3)-β-D-葡萄糖苷品牌  diosgenin-3-O-β-D-xylosyl-(1→3)-β-glucoside

犬巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒 Canine Macrophage-Derived Chemokine,MDC/CCL22 ELISA Kit  3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-葡萄糖麥冬甙元規格  Ophiogenin-3-O-α-L-rhamnosyl-(1→2)-β-D-glucoside
PrimaCell™人少突膠質前體細胞試劑盒培養27200-12-0二氫楊梅素規格  Dihydromyricetin   英文名稱RatTissuePolypeptideAigenELISAKit大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISAKit規格：96T/48T

27013-91-8α-常春藤皂苷規格  α-hederin   英文名稱RatTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規格：96T/48T

26904-64-3氧化槐果堿說明書  Oxysophocarpine   英文名稱RatTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規格：96T/48T

26833-87-4高三尖杉酯堿  Homoharringtonine   英文名稱Ratthyroopin-releasinghormoneELISAKit大鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2680-81-1去氫二異丁香酚品牌  Dehydrodiisoeugenol  英文名稱Ratthyroopin-releasinghormoneELISAKit大鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA試劑盒規格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。