小鼠角膜上皮細胞提取物培養

小鼠角膜上皮細胞提取物【Mouse Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】

小鼠角膜上皮細胞提取物是從小鼠原代角膜上皮細胞提取的，小鼠原代角膜上皮細胞從正常小鼠眼組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

抗生素（氯霉素、沙星類、甲硝唑類） 快速檢測三拼卡96Tn-Octylbenzene2189-

糖皮質激素快速檢測三拼卡96TNitrendipine3956尼群地平

花生源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNisoldipine636752尼索地平

馬、驢源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNifuroxazide9652硝呋酚酰肼

牛源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNifedipine218295硝苯地平
HumanPlatelet-DerivedGrowthFactor-BB，PDGF-BBELISAKit人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規格：96T/48T  2,2'-Bicinchoninic acid  中文名：2,2'-二辛可寧酸  分子式：C20H12N2O4 

HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorAB，PDGF-ABELISAKit人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規格：96T/48T  2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  109113-72-6  中文名：  分子式：C10H9ClN2 

Humanplatelet-derivedgrowthfactor，PDGFELISAKit人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒規格：96T/48T  2,2'-Anhydro-5-methyluridine  22423-26-3  中文名：2,2'-O-脫水-5-甲基尿嘧啶核苷  分子式：C10H12N2O5 

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit人血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA試劑盒規格：96T/48T  2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  中文名：  分子式：C8H16O4 

Humanplatelet-associatedimmunoglobulins,PAIgELISAKit人血小板相關球蛋白(PAIg)ELISA試劑盒規格：96T/48T  2-(5-Chloro-2-phenoxyphenyl)acetic acid  中文名：  分子式：C14H11ClO3
細胞松弛素E(>98%，BR)  Cytochalasin E  質量規格：>98%，BR 活體細胞氧化應激活性氧(ROS)原位熒光染色試劑盒(羥自由基)20

D-樟腦酸(>99%,BR)  D-(+)-Camphoric acid  質量規格：>99%,BR 活體細胞組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)  D-(+)DBTA, Dibenzoyl-D-tartaric acid, monohydrate  質量規格：>98%，BR 活體細胞組織蛋白酶K(CATHEPSINK)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

己二烯二胺(>98%，BR)  DATD, (+)-N,N'-Diallyltartramide  質量規格：>98%，BR 活體細胞組織蛋白酶L(CATHEPSINL)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)  DDSA, dodecenylsuccinic anhydrous  質量規格：>98%，BR 活體組織線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒10

癸二酸(>96%，BR)  Decanedioic acid  質量規格：>96%，BR 活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒40/100

脫氫乙酸(>98%，BR)  Dehydroacetic acid  質量規格：>98%，BR 活體組織氧化應激活性氧(ROS)高質綠色熒光測定試劑盒8/20

脫羰秋水仙堿  Demecolcine  質量規格：>98%，進分 活體組織氧化應激活性氧(ROS)熒光測定試劑盒(氯酸離子)20

DON，嘔吐；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(>98%(HPLC),BR)  Deoxynivalenol  質量規格：>98%(HPLC),BR 活體組織氧化應激活性氧(ROS)熒光測定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)20

第威德合金  Devarda's alloy  質量規格：工業級 火炬松(loblollypine)培養基500毫升溶液/片劑
小鼠角膜上皮細胞提取物培養內皮細胞合酶 (eNOS)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝     Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3 

內皮素受體A   英文名稱：   Human Endothelin Receptor A   規格：   48T/96T   英文縮寫：   EA  2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17 

內皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  Oxandrolone  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3 

腺來源的內皮生長因子   英文名稱：   endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor   規格：   48T/96T   英文縮寫：   EG-VEGF  β-Sitosterol  83-46-5  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  關鍵詞：  豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

內啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3  度：98.0%  關鍵詞：