小鼠角膜上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

小鼠角膜上皮細(xì)胞提取物【Mouse Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】

小鼠角膜上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代角膜上皮細(xì)胞提取的，小鼠原代角膜上皮細(xì)胞從正常小鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

抗生素（氯霉素、沙星類、甲硝唑類） 快速檢測三拼卡96Tn-Octylbenzene2189-

糖皮質(zhì)激素快速檢測三拼卡96TNitrendipine3956尼群地平

花生源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNisoldipine636752尼索地平

馬、驢源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNifuroxazide9652硝呋酚酰肼

牛源性恒溫核酸檢測試劑盒24T/48TNifedipine218295硝苯地平
HumanPlatelet-DerivedGrowthFactor-BB，PDGF-BBELISAKit人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2,2'-Bicinchoninic acid  中文名：2,2'-二辛可寧酸  分子式：C20H12N2O4 

HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorAB，PDGF-ABELISAKit人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  109113-72-6  中文名：  分子式：C10H9ClN2 

Humanplatelet-derivedgrowthfactor，PDGFELISAKit人血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2,2'-Anhydro-5-methyluridine  22423-26-3  中文名：2,2'-O-脫水-5-甲基尿嘧啶核苷  分子式：C10H12N2O5 

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit人血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  中文名：  分子式：C8H16O4 

Humanplatelet-associatedimmunoglobulins,PAIgELISAKit人血小板相關(guān)球蛋白(PAIg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2-(5-Chloro-2-phenoxyphenyl)acetic acid  中文名：  分子式：C14H11ClO3
細(xì)胞松弛素E(>98%，BR)  Cytochalasin E  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)原位熒光染色試劑盒(羥自由基)20

D-樟腦酸(>99%,BR)  D-(+)-Camphoric acid  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 活體細(xì)胞組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)  D-(+)DBTA, Dibenzoyl-D-tartaric acid, monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 活體細(xì)胞組織蛋白酶K(CATHEPSINK)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

己二烯二胺(>98%，BR)  DATD, (+)-N,N'-Diallyltartramide  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 活體細(xì)胞組織蛋白酶L(CATHEPSINL)活性原位熒光染色檢測試劑盒20

十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)  DDSA, dodecenylsuccinic anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒10

癸二酸(>96%，BR)  Decanedioic acid  質(zhì)量規(guī)格：>96%，BR 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒40/100

脫氫乙酸(>98%，BR)  Dehydroacetic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒8/20

脫羰秋水仙堿  Demecolcine  質(zhì)量規(guī)格：>98%，進(jìn)分 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測定試劑盒(氯酸離子)20

DON，嘔吐；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(>98%(HPLC),BR)  Deoxynivalenol  質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BR 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測定試劑盒(過氧亞硝基陰離子)20

第威德合金  Devarda's alloy  質(zhì)量規(guī)格：工業(yè)級 火炬松(loblollypine)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
小鼠角膜上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞合酶 (eNOS)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3 

內(nèi)皮素受體A   英文名稱：   Human Endothelin Receptor A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EA  2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17 

內(nèi)皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxandrolone  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3 

腺來源的內(nèi)皮生長因子   英文名稱：   endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EG-VEGF  β-Sitosterol  83-46-5  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

內(nèi)啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：