人腦成纖維細胞提取物說明書

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人腦成纖維細胞提取物【Human Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives】

人腦成纖維細胞提取物是從人原代腦成纖維細胞提取的，人原代腦成纖維細胞從正常人腦成纖維組織制備。正常人腦成纖維肌組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

手足口病腸道病毒（EV71）單重熒光PCR檢測試劑盒48Ethyl 2-(3-cyano-hydroxyphenyl)-methyl,3-thiazole-carboxylate1617982

手足口病科薩奇A16病毒（CoxA16）單重熒光PCR檢測試劑盒48Ethyl 2-(3-cyano-isobutoxyphenyl)-methyl-thiazolecarboxylate18445

手足口病EV71型/CoxA16型病毒雙重熒光PCR檢測試劑盒48Ethyl 2-(3-formyl-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617981

手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重熒光PCR檢測試劑盒48Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617979

諾如病毒G1/ G2分型雙重熒光PCR檢測試劑盒48Febuxostat143非布索坦
N4-Benzoylcytosine  26661-13-2  中文名：N4-苯甲酰基胞嘧啶  分子式：C11H9N3O2    DPD臭氧測定試劑盒   DPD ozone reage kit

Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  3669-41-8  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3    臭氧快速試劑盒   Ozone rapid reage kit

5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  13574-13-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6    DPD余測定試劑盒   DPD residual  test kit              

N6-Benzyladenine  1214-39-7  中文名：N6-芐基腺嘌呤  分子式：C12H11N5    水樣中離子（Hg2+）濃度測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

Benzidamine hydrochloride  132-69-4  中文名：鹽酸芐達明  分子式：C19H24ClN3O    水樣中六價鉻離子（Cr6+）濃度測試盒   可見分光光度法   50管/48樣
胰島素樣生長因子I（57-70）  Insulin-like Growth Factor I (57-70)  質量規格：>95%,BR 小鼠尾加壓素2受體(S2R)ELISA試劑盒 ，英文名： S2R ELISA Kit

胰島素樣生長因子Ⅱ（69-84）  Insulin-Like Growth Factor II(69-84)  質量規格：>95%,BR 小鼠味覺受體1型成員2(TAS1R2)ELISA試劑盒 ，英文名： TAS1R2 ELISA Kit

白介素-1β轉化酶底物  Interleukin-1β Convertase Substrate  質量規格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA檢測試劑盒MousePepsinELISAKit 96T/48T

下鈣素  Katacalcin  質量規格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA試劑盒 ，英文名： Pepsin ELISA Kit

肯普肽  Kemptide  質量規格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(PG)ELISA試劑盒 ，英文名： PG ELISA Kit

運動升壓素  Kinetensin  質量規格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原A(PGA)ELISA試劑盒 ，英文名： PGA ELISA Kit

層粘連蛋白（925-933）  Laminin (925-933)  質量規格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原C(PGC)ELISA試劑盒 ，英文名： PGC ELISA Kit

層粘連蛋白（929-933）  Laminin (929-933)  質量規格：>95%,BR 小鼠胃動素(MOT)ELISA試劑盒 ，英文名： MOT ELISA Kit

層粘連蛋白九肽，酰胺  Laminin Nonapeptide, Amide  質量規格：>95%,BR 小鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒 ，英文名： MTL ELISA Kit

白細胞焦激肽（4-8）；Pheromonotropic五肽  Leucopyrokinin (4-8);Pheromonotropic Pentapeptide  質量規格：>95%,BR 小鼠胃泌素(GAS)ELISA試劑盒 ，英文名： GAS ELISA Kit
人腦成纖維細胞提取物說明書Trenbolone heptanoate  中文名：  分子式：C25H34O3    魚球蛋白M（IgM）ELISA試劑盒  

Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  中文名：群勃龍環己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4    魚類主要組織相容性復合體(MHC)ELISA試劑盒           

Trenbolone acetate  中文名：  分子式：C20H24O3    愈創木酚   50g

Trenbolone  中文名：群勃龍  分子式：C18H22O2    Guaiacol   100g

Trehalose  中文名：海藻糖  分子式：C12H22O11    鹽酸胍   100g

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。