人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物

人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物【Human Brain: Normal Cerebral Artery Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】

人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物是從人原代腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取的，人原代腦動脈血管平滑肌細(xì)胞從正常人腦動脈血管平滑肌組織制備。正常人腦動脈血管平滑肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

手足口CA6單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Dicyclanil1126363地昔尼爾

手足口CA單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Iloperidone1334547伊潘立酮

乙腦病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒484-[(4-Methylpiperazin-yl) methyl]benzoic acid dihydrochloride62619甲磺酸伊馬替尼

腮腺炎病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒484-(4-Aminophenyl)morpholin-one43569

單純皰疹病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48N-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide1615967
N4-Benzoylcytidine  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒  

3-Benzoylthiazolidine-2-thione  中文名：3-苯甲酰噻唑烷-2-硫酮  分子式：C10H9NOS2  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒  

Betamethasone  中文名：倍他米松  分子式：C22H29FO5  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒  

(S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  中文名：(S)-(+)-4-芐基-3-丙酰-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒           

5-Benzyl D-glutamate  中文名：D-谷氨酸5-苯甲酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體成分5   英文名稱：   Mouse Compleme Compone 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   C5
胰蛋白酶1:2500  Trypsin 1:2500 from Porcine pancreas  質(zhì)量規(guī)格：>2500U/MG 人單胺氧化酶(MAO)試劑盒 Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit

阿利苯多  Alibendol  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人單皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgG)試劑盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgG)ELISA kit

核糖核酸酶A(美侖)；RNase A;核糖核酸酶I  Ribonuclease A from bovine pancreas  質(zhì)量規(guī)格：≥50 U/mg,美侖 人單皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgM)試劑盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgM)ELISA kit

5‘-吡哆醛，一水  Pyridoxal 5-phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人單皰疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗體(IgG)試劑盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgG)ELISA Kit

NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏)  Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,羅氏進(jìn)分 人單皰疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗體(IgM)試劑盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgM)ELISA kit

NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(美侖)  Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)  質(zhì)量規(guī)格：>97%,國產(chǎn)美侖 人單皰疹病毒Ⅱ型抗體IgG(HSVⅡ-Ab)試劑盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgG aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit

葡萄糖氧化酶  Glucose oxidase  質(zhì)量規(guī)格：BR,>200U/mg 人單皰疹病毒Ⅱ型抗體IgM(HSVⅡ-Ab)試劑盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgM aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit

溶菌酶(蛋清)  Lysozyme,from egg white  質(zhì)量規(guī)格：2萬U/mg,分子生物學(xué)級 人單皰疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)試劑盒 Human Herpes simplex virus,HSV-Ag1 ELISA Kit

HRP;辣根過氧化物酶  Peroxidase, Horseradish(HRP)  質(zhì)量規(guī)格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg 人單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒 Human MCP-1 ELISA kit

透明質(zhì)酸酶  Hyaluronidase  質(zhì)量規(guī)格：≥500IU/mg,BR,牛源提取 人單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒 Human MCP-2 ELISA kit
人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞提取物Trillin  14144-06-0  中文名：延齡草苷  分子式：C33H52O8  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  血小板聚集抑制劑; 吉林延齡草; 螺甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit  

Triethyl   77-93-0  中文名：檸檬酸三乙酯  分子式：C12H20O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISAKit  

Tricetyl fingolimod  162358-09-0  中文名：  分子式：C25H39NO5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    中文名稱   方法   規(guī)格           

Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠孕激素/孕(PROG)ELISAKit  

Trenbolone heptanoate  N  中文名：  分子式：C25H34O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISAKit