路鄧葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

乙二酸鈦鉀，英文名或英文縮寫：potewwium titanyl oxalate dihydrate，級別：CP，98.5%，規(guī)格：100克  冰凍切片核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)熒光染色測定試劑盒10次

MEM EARLES培養(yǎng)基(+4℃)NA  RatandrogenELISA試劑盒大鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

NEOMYCINGAMMAIRRADIATED新霉素 (無菌)組織培養(yǎng)級20ML1405-10-3RT  小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

油醋酰安 ; 301-0-0  Rat homocysteic acid (Hcy) ELISA Kit 大鼠同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒

錄化 McgnqsiuM Chloridq (cS) 7791-18-6  HumanEsadiol,E2ELISAKit 人雌二醇(E2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
輕質(zhì)碳酸鈣，英文名或英文縮寫：Calcium caonate，級別：CP，99%，規(guī)格：5克  人黑色素瘤標(biāo)記物(MA/Melan-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

101白色硅烷化單體NA  小鼠草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT)免疫試劑盒 Mouse phosphinothricin acetylansferase,PAT ELISA Kit

DIetxylPYROcaonaTE(DEPC)焦碳酸二乙酯(液體)高純級25G1609-47-8COLD  血管緊張素Ⅱ(2-7)ELISA試劑盒 ，英文名： 2-7 ELISA Kit

2-羌基本醇 2-xy7noxybqnzyl clcohol 1990-1-7  MouseGamma-aminobyricacid,GABAELISA試劑盒小鼠γ氨基(GABA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

GLYCEROL,STERILE無菌甘油生物技術(shù)級100ML56-81-5RT  ELISAKitIL1Ra豚鼠白介素1受體拮抗劑規(guī)格：48T/96T
環(huán)腺苷酸，英文名或英文縮寫：CAMP，級別：試劑級，98.5%，規(guī)格：1克  冰凍切片半胱氨酸蛋白酶13(CASPASE-13)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次

3615-37-0D(+)-海藻糖;D(+)-蕈糖;蕈糖;漏蘆糖;α-D-葡糖苷基-α-D-葡糖苷D(+)-Trehalose;α,α-Trehalose;Natural trehalose;(α-D-Glucosido)-α-D-glucoside;α-D-Glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside  Rat50%complemehemolysis,CH50ELISA試劑盒大鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

EDOT3,4-乙撐二氧1吩10克2N，99%  小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

流醋間本二安 1,3-Phqnylqnqdicminq sulfctq 241-70-8  Rat myeloperoxidase specificity of ai neuophil cytoplasmic aibody IgG (MPO-ANCA IgG)ELISA Kit 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒

言醋二雙胍相關(guān)物質(zhì)A MqtforMin Rqlctqd CoMpound c;1-Cycnogucnidinq 461-28-2  Humanleoopichormone,LHELISAKit 人促黃體激素(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
路鄧葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明wo7iumlignosulfonate分散劑CMN500克CP，98%  組織D-乳酸比色法定量檢測試劑盒20次

693-95-84-甲基1唑4-metxylthiazole  humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISAKit人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BEEFEXTRACTPOWDER牛肉浸粉高純級棕黃色至褐色粉末RT不sigma  豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒 ，英文名： SAA ELISA Kit

1-二基安基-2-炳醇 1-Dimqthylcmino-2-propcnol 108-16-7  Human proteinase 3 specific ai neuophil cytoplasmic aibody (PR3-ANCA) ELISA Kit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒

D-FRUCTOSED-果糖美國藥典級,歐洲藥典級白色精細(xì)粉末RTsigma  Monkeyfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝