人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物【The Human Brain: Normal Brain Artery Endothelial Cell Derivatives】

人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取的，人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞從正常人腦動脈組織制備。正常人腦動脈組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

沙眼衣原體核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sulfaclozine25磺胺氯吡嗪

肺炎支原體核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sucrose5

乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒(PCR熒光探針法)盒Succinic acid15

人類免疫缺陷病毒I型核酸定量檢測試劑盒盒Strontium ranelate1354597雷尼酸鍶

B族鏈球菌核酸檢測試劑盒盒Stigmasterol838豆甾醇
N,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine  152120-54-2  中文名：N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒  分子式：C14H22N4O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞色素C   英文名稱：   Cytochrome C   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Cytochrome C

N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)oxamide  1871-89-2  中文名：N,N'-雙(2-羥乙基)草酰胺  分子式：C6H12N2O4  度：98.0%      小鼠超敏C反應(yīng)蛋白   英文名稱：   Mouse C Reactive Protein HS   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CRP-hs

N,N-Bis(2-chloroethyl)-p-sulphonamide  42137-88-2  中文名：N,N-雙(2-氯乙基)對甲苯磺酰胺  分子式：C11H15Cl2NO2S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠鈣蛋白   英文名稱：   Mouse Calprotectin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CP

N-(Quinoxalin-2-yl)-4-(quinoxalin-2-ylamino)benzenesulfonamide  NO  中文名：  分子式：C22H16N6O2S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞表面分子CD100   英文名稱：   Mouse cluster of differeiation 100   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CD100

N-(4-Cyanophenyl)glycine  42288-26-6  中文名：  分子式：C9H8N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒
野鴉椿素B HPLC≥95% 20mg RatInhibin,INH-AELISA試劑盒大鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氧代甘遂,二烯酸 HPLC≥95% 20mg RatinhibinB,INH-BELISAKit大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克羅酰胺 HPLC≥98% 20mg RatinhibinB,INH-BELISA試劑盒大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

野甘草酸 HPLC≥95% 20mg RatInhibinbindingprotein,INHBPELISAKit大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N對香豆酰真蛸胺 HPLC≥95% 20mg RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA試劑盒大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N阿魏酰真蛸胺; N 阿魏酰章魚胺 HPLC≥95% 20mg RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISAKit大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

早熟素Ⅱ HPLC≥95% 20mg RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISA試劑盒大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鴨腳木堿 HPLC≥95% 20mg RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

烏沙苷元洋地黃苷 HPLC≥95% 20mg RatInsulieceptorβ,ISR-βELISA試劑盒大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植酮 HPLC≥98% 20mg RatInsulin,INSELISAKit大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)Uzarigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H46O8    魚促性腺激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒           

Uzarigenin  中文名：  分子式：C23H34O4    魚類促性腺激素釋放激素  

ucralose  中文名：三氯蔗糖  分子式：C12H19Cl3O8    魚類狀腺原酸(T3)ELISAKit  

Tryptophan  中文名：  分子式：C11H12N2O2    魚類皮質(zhì)醇(Coisol)ELISAKit  

Troxerutin  中文名：曲克蘆丁  分子式：C33H42O19    魚類超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISAKit