人胰腺上皮細(xì)胞提取物說明書

人胰腺上皮細(xì)胞提取物【Human Pancreas : Normal Pancreatic Epithelial Cell Derivatives】

人胰腺上皮細(xì)胞提取物是從人胰腺上皮細(xì)胞提取的，人胰腺上皮細(xì)胞從正常人胰腺組織制備。正常人胰腺組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

沙星類（氟喹諾酮類）Elisa檢測試劑盒96Atrazine19124阿特拉津

呋喃唑酮代謝物Elisa檢測試劑盒961,4-Benzodioxan-carboxylic acid3661,4-苯并-羧酸

呋喃它酮代謝物Elisa檢測試劑盒96Benzo[b]thiophene-carboxylic acid63148苯并噻吩-羧酸

呋喃妥因代謝物Elisa檢測試劑盒961-Benzothiophene-carbaldehyde5383-甲醛苯并噻吩

呋喃西啉代謝物Elisa檢測試劑盒96D(-)-Arginine1576D-精氨酸
N-(4-Cyanophenyl)glycine  中文名：  分子式：C9H8N2O2    豬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒  

N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine  中文名：  分子式：C16H13N5O2    豬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒  

N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S    豬S-100B蛋白（S-100B）ELISA試劑盒           

N-(2-Hydroxyethyl)-3-(4-nitrophenyl)propylamine  中文名：  分子式：C11H16N2O3    豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISAKit  

N-(2,6-Dimethylphenyl)-2-piperidinecarboxamide  中文名：  分子式：C14H20N2O    豬食欲素受體(OXR)ELISAKit
野馬追內(nèi)酯B（標(biāo)準(zhǔn)品）  Eupalinolide B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒RabbitIerleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T

長春瑞濱（標(biāo)準(zhǔn)品）  Vinorelbine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品，長期不穩(wěn)定 兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA檢測試劑盒RabbitCystatinC,Cys-CELISAKit 96T/48T

長春瑞濱（標(biāo)準(zhǔn)品）  Vinorelbine tartrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA檢測試劑盒RabbitCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T

硝呋太爾  Nifuratel  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 兔超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA檢測試劑盒RabbithighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T

硝呋太爾(標(biāo)準(zhǔn)品)  Nifuratel  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 兔兒茶酚胺(CA)ELISA檢測試劑盒Rabbitcatecholamine,CAELISAKit 96T/48T

羥基酪醇；3,4-二羥基苯乙醇(標(biāo)準(zhǔn)品)  Hydroxytyrosol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA檢測試劑盒RabbitLebtospiraIgGELISAKit 96T/48T

棕矢車菊素（標(biāo)準(zhǔn)品）  4',5,7-Trihydroxy-3',6-dimethoxyflavone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔骨橋素(OPN)ELISA檢測試劑盒RabbitOsteopoin,OPNELISAKit 96T/48T

銀椴苷；椴樹苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tiliroside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA檢測試劑盒RabbitPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 96T/48T

芫花素（標(biāo)準(zhǔn)品）  4',5-Dihydroxy-7-methoxyflavone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔合成酶(NOS)ELISA檢測試劑盒Rabbitniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T

客西茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Khasianine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 兔環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒Rabbitcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit 96T/48T
人胰腺上皮細(xì)胞提取物說明書Valnemulin hydrochloride  中文名：鹽酸沃尼妙林  分子式：C31H53ClN2O5S  度：98.0%  小鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒  

2-Chloromethyl-3-methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine hydrochloride  中文名：  分子式：C9H10Cl2F3NO  度：98.0%  小鼠蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)ELISA試劑盒  

Rizatriptan benzoate  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2  度：98.0%  小鼠蛋酸酯酶2B（PP-2B）ELISA試劑盒  

Dexmedetomidine hydrochloride  中文名：鹽酸右美托咪定  分子式：C13H17ClN2  度：98.0%  小鼠蛋酸酶(PP)ELISA試劑盒            

Sitafloxacin  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3  度：98.5%  小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISAKit