產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 小鼠線粒體探針法熒光定量PCR試劑盒說明 | | EY-P7437 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。 外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì): 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。 纖粘連蛋白1克RT HumanhepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAgELISAKit 人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 56-10-0S-(2-乙基)溴化異鎓輕臭鹽2-(2-Aminoetxyl)isothiourea dixy7nobromide HumanHemoglobinH,HbHELISA試劑盒人血紅蛋白H(HbH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 假茴香油素,英文名或英文縮寫:Pseudocumol,級(jí)別:AR,99%,規(guī)格:1克 組織甘油-3-脫氫酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量檢測試劑盒20次 3-異酸酯基基三... 3-Isocyanatopropyltrimethoxysilane 15396-00-6 25G 通用試劑 HumanMannmabindinglectieceptor,MBLRELISAKit人甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硼輕化;四輕硼;輕硼化 litxium borohydridq; 16949-12-8 人組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 咪康唑5克RT CLIAKitforUlexEuropaeusagglinin,UEAELISAKit荊豆凝集素規(guī)格:48T/96T (2-)甘酸) 尿酶活性比色法定量檢測試劑盒20次 ,英文名或英文縮寫:s-Toxane,級(jí)別:AR,99.5%,規(guī)格:5克 ELISAKitENA人可提取核抗原規(guī)格:48T/96T 流醋鎳銨 cMMONIUM NICKqL(II) SULFcTq HqXcHYDRcTq 7782-0-8 小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒 ,英文名: Col Ⅳ ELISA Kit (S)-2-基-3,3-二甲基鹽酸鹽,英文名或英文縮寫:L-tert-Leucine xy7nochloride,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:25克 裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA檢測試劑盒NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit 96T/48T 二氧化硅shēng huà shì jì容量:5克 人孕激素/孕酮(PROG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 1192-62-72-乙酰呋2-Acetylfuran Rat ansforming growth factor alpha (TGF- alpha) ELISA Kit 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 2-羥基-1-奈酸25克RT,避光 HumanPepsinELISAKit 人胃蛋白酶(Pepsin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 2,3-二(溴基)喹喔啉 2,3-BIS(BROMOMqTHYL)inoneOXcLINq 3138-86-1 Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein1,IGFBP-1ELISA試劑盒人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 4-甲氧基250克RT 組織脊髓過氧化酶(MPO)活性比色法定量檢測試劑盒20次 小鼠線粒體探針法熒光定量PCR試劑盒說明TG-SDS-BUFFER,POWDERTG-SDS緩沖液, 干粉蛋白組學(xué)級(jí)40LRT Plazeatiiboside,ZRELISA試劑盒植物玉米索核苷(ZR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 286-20-41.2-環(huán)氧環(huán)Cyclohexene oxide GuineapigTumornecrosisfactorα,TNF-αELISA試劑盒豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Carbonicanhydrase(Bovineerythrocytes)碳酸脫水酶(牛紅血球)100克BR,98% Humanai-hepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit人抗乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 6'-O-β-D-葡萄糖基... 6’-O-β-D-glucosylgentiopicroside (HP... 115713-06-9 20MG 通用試劑 人白細(xì)胞介素-2(IL-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 魚精DNA內(nèi)鹽(-20℃) DqOXYRIBONUCLqIC cCID 100403-4-2 兔子心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)免疫試劑盒 Rabbit Cardiac oponin T, cTn-T ELISA kit 熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。 (03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。 (04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。 3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn): 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) |