我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現(xiàn)貨,超低比價,產品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | PrimaCell™大鼠腎足突細胞試劑盒培養(yǎng) | | EYX99660 |
PrimaCell™大鼠腎足突細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 細胞培養(yǎng)方法; 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
實驗事項; 1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。 腎上腺髓質素(ADM)ELISA檢測試劑盒Monkeyadrenomedullin,ADMELISAKit 96T/48T 88901-45-5羅漢果皂苷ⅡA2 mogroside ⅡA2 犬類風濕因子(RF)試劑盒 Canine rheumatoid factor(RF)ELISA Kit 88901-42-2羅漢果皂苷ⅢA1說明書 mogroside ⅢA1 英文名稱HumanPAIgG/M/AELISAKit人血小板抗體規(guī)格:96T/48T 1126032-65-2異-羅漢果皂苷V品牌 isomogroside V 化線粒體DNA萃取試劑盒20 88915-64-4羅漢果苷IV規(guī)格 Mogroside IVe Ratinsulinaoaibodies,IAAELISA試劑盒大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 88901-41-1羅漢果皂苷IVa mogroside IVa 20736-08-7柴胡皂苷C規(guī)格 Saikosaponin C 英文名稱RatPGE1ELISAKit大鼠前列腺素E1(PGE1)規(guī)格:96T/48T 2068-78-2硫酸長春新堿品牌 Vincristine Sulphate 英文名稱RatPCNAELISAKit大鼠增殖細胞抗原(PCNA)規(guī)格:96T/48T 20633-67-4毛蕊異黃酮苷品牌 Calycosin-7-glucoside 英文名稱RatPCNAELISAKit大鼠增殖細胞抗原(PCNA)規(guī)格:96T/48T 20575-57-9毛蕊異黃酮說明書 Calycosin 英文名稱RatPaRathyroidHormone-LikeRelatedProteinELISAKit大鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)規(guī)格:96T/48T 20554-84-1小白菊內酯品牌 Parthenolide 英文名稱RatPaRathyroidHormone-LikeRelatedProteinELISAKit大鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)規(guī)格:96T/48T 小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑盒 ,英文名: MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit 58479-68-8桔梗皂苷D規(guī)格 Platycodin D 小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA檢測試劑盒Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 96T/48T 66663-90-9桔梗皂苷D2 Platycodin D2 人抗Smith抗體(Sm)試劑盒 Human ai-Smith aibody ELISA Kit 78763-58-3去芹糖桔梗皂苷D說明書 Deapio platycodinD Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit大鼠17羥孕同(17-OHP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 6537-80-0菊苣酸品牌 Cichoric Acid 載玻片細胞MAPK蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 481-53-8橘紅素規(guī)格 Tangeretin PrimaCell™大鼠腎足突細胞試劑盒培養(yǎng)6537-80-0菊苣酸品牌 Cichoric Acid 組蛋白H3-K18(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等 65-19-0鹽酸育亨賓品牌 Yohimbine 組蛋白H3-K14乙酰化檢測試劑盒10/20等 64-86-8秋水仙堿說明書 Colchicine 組蛋白H3-K122(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等 64849-39-4甜葉懸鉤子苷說明書 Rubusoside 組蛋白H2B-K5乙酰化檢測試劑盒10/20等 64849-39-4甜茶苷說明書 Rubusoside 組蛋白H2B-K46乙酰化檢測試劑盒10/20等 注意事項; 1. 接收到,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |