小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物

小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物【Mouse Fat: Normal Visceral Fat Cells Derivatives】

小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物是從小鼠原代內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取的，小鼠原代內(nèi)臟脂肪細(xì)胞從正常小鼠脂肪組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

膠原酶I   0mg3-Ethoxyandrosta,5-dien7-one97263-乙氧基-雄甾,5-二烯7-酮

膠原酶II   0mg9-Dehydroandrostenedione3599-去氫雄烯二酮

膠原酶IV   0mg5-Androstenβ-ol7-one ethyleneketal774

膠原酶V   0mg3-Amino-phenylpyrazole1573-氨基-苯基吡唑

焦磷酸鈉   0g3-Amino-phenyl-propa459343-氨基-苯基-丙醇
humanParathyroidhormone,PTHELISAKit人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  18531-94-7  中文名：(R)-(+)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚  分子式：C20H14O2 

Humanparaoxonase,PONELISAKit人酶(PON)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1S,2S)-1-Amino-2-Indanol  中文名：(1S,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO 

HumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit人腮腺炎病毒IgMELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1S,2R)-2-Ami,2-diphenylethanol  23364-44-5  中文名：(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO 

HumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit人腮腺炎病毒IgGELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1S)-4,5-Dimethoxy-1-[(methylamino)methyl]benzocyclobutane hydrochloride  中文名：  分子式：C12H18ClNO2 

Humanpara-aminobenzoicacid,PABAELISAKit人對(duì)(PABA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1R,2S)-2-Ami,2-diphenylethanol  23190-16-1  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO
無(wú)水二氫鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）   Dihydrogen Phosphate Anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ，英文名： SDH ELISA Kit

長(zhǎng)春西?。?biāo)準(zhǔn)品）  Vinpocetine  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 ，英文名： ENA-78/CXCL5 ELISA Kit

枸櫞酸鉍雷尼替?。?biāo)準(zhǔn)品）  Ranitidine bismuth   質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISA試劑盒 ，英文名： OMgp-Ab ELISA Kit

丹曲林鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Dantrolene  hemiheptahydrate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T

呱西替柳（標(biāo)準(zhǔn)品）  Guacetisal  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒 ，英文名： GFAP ELISA Kit

鹽酸黃酮哌酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Flavoxate hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 ，英文名： fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit

3-甲基黃酮-8-羧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  3-Methylflavone-8-carboxylic acid  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)導(dǎo)向因子Slit2ELISA檢測(cè)試劑盒MouseNeuronalChemorepelleSlit2ELISAKit 96T/48T

鹽酸番茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tomatidine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseNervegrowthfactor,NGFELISAkit 96T/48T

鹽酸頭孢唑蘭  Cefozopran hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒 ，英文名： NGF ELISA Kit

阿嗪米特（標(biāo)準(zhǔn)品）  Azintamide  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體(proNGF)ELISA試劑盒 ，英文名： proNGF ELISA Kit
小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞提取物人P27蛋白elisa試劑盒   人P27蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人P27蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人P27蛋白試劑盒、人P27蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Schleicheol 1  256445-66-6  中文名：  分子式：C30H52O2  度：%  關(guān)鍵詞：  抗癌; 久樹(shù); 豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

人H-rasELISAKit                 3-(5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate (2R,3R)-2,3-dihydroxysuccinate  中文名：  分子式：C26H31N3O8 

人HA絲酸肽酶1(HA1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human HA1 (HA Serine Peptidase 1) ELISA Kit                  3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphthalen-1(2H)-one  中文名：  分子式：C10H10O3 

人Dickkopf1elisa試劑盒   人Dickkopf 1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人Dickkopf 1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人Dickkopf 1試劑盒、人Dickkopf 1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Testosterone benzoate  2088-71-3  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人chemerinelisa試劑盒   人chemerin試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人chemerin試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人chemerin試劑盒、人chemerin elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Triethyl   77-93-0  中文名：檸檬酸三乙酯  分子式：C12H20O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)