PrimaCell™小鼠成骨細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)

PrimaCell™小鼠成骨細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

犬孕激素/孕酮(PROG)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineProgesterone,PROGELISAkit 96T/48T  84687-43-4黃芪甲苷  Astragaloside IV

犬維生素A(VA)試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit  84680-75-1黃芪皂苷I說(shuō)明書(shū)  Astragaloside I  

英文名稱(chēng)HumanGlycoprotein96ELISAKit人腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  84676-89-1黃芪皂苷II品牌  Astragaloside II

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測(cè)試劑盒50  84687-42-3黃芪皂苷Ⅲ規(guī)格  Astragaloside III

RatGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISA試劑盒大鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  17429-69-5黃芪總皂苷  Astragaloside
572-30-5扁蓄苷品牌  Avicularin   豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 Porcine oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit

572-30-5扁蓄苷規(guī)格  Avicularin   豬氧還原蛋白過(guò)氧化物酶2(PRDX2)試劑盒 Pig peroxiredoxin 2,PRDX2 ELISA kit

57-22-7長(zhǎng)春新堿規(guī)格  Vincristine   豬血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)試劑盒 Porcine platelet-derived growth factor,PDGF ELISA Kit

57-22-7長(zhǎng)春新堿規(guī)格  Vincristine   豬血小板活化因子(PAF)試劑盒 Pig platelet activating factor,PAF ELISA Kit

568-73-0丹參酮I規(guī)格  Tanshinone I   豬血小板活化因子(PAF)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 96T/48T
貓細(xì)小病毒抗體(FPV)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T  539-86-6大蒜素品牌  Allicin

犬血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)試劑盒 Canine serum amyloid A2,SAA2 ELISA Kit  55481-88-4大葉茜草素規(guī)格  Rubimaillin

英文名稱(chēng)MouseAILR3ELISAKIT小鼠AILR3規(guī)格：96T/48T  122021-74-3丹參酚酸B甲酯  Monomethyl lithospermate B 

腸胃活檢螺旋桿菌(H.PYLORI)吉姆薩(GIEMSA)染色試劑盒50  22681-72-7丹參素說(shuō)明書(shū)  Danshensu

RatGATAbindingprotein4,GATA4ELISA試劑盒大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  67920-52-9丹參素鈉品牌   Danshensu
PrimaCell™小鼠成骨細(xì)胞試劑盒培養(yǎng)28808-62-0梣酮品牌  Fraxinellone   英文名稱(chēng)RatVitaminB6ELISAKit大鼠維生素B6(VB6)規(guī)格：96T/48T

28649-60-7環(huán)氧續(xù)隨子醇品牌  Epoxylathyrol    英文名稱(chēng)RatVIII-AgELISAKit大鼠凝血因子VIII相關(guān)抗原(VIII-Ag)規(guī)格：96T/48T

28608-75-5葒草苷說(shuō)明書(shū)  Orientin   英文名稱(chēng)RatVIII-AgELISAKit大鼠凝血因子VIII相關(guān)抗原(VIII-Ag)規(guī)格：96T/48T

28543-07-9茶黃素-3＆#146;-沒(méi)食子酸酯說(shuō)明書(shū)  Theaflavin-3＆#146;-Gallate  (TF-3＆#146;-G)   英文名稱(chēng)RatVasoactiveIestinalPeptideELISAKit大鼠血管活性腸肽(VIP)規(guī)格：96T/48T

28282-25-9β-欖香酮酸品牌  β-EleMonic acid    英文名稱(chēng)RatVasoactiveIestinalPeptideELISAKit大鼠血管活性腸肽(VIP)規(guī)格：96T/48T

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。