大鼠食管上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

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大鼠食管上皮細(xì)胞提取物【Rat Esophagus: Normal Esophageal Epithelial Cell Derivatives】

大鼠食管上皮細(xì)胞提取物是從大鼠食管上皮細(xì)胞提取的，大鼠食管上皮細(xì)胞從正常大鼠食管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

艱難梭菌核酸檢測試劑盒盒Stanozolol4183康力龍

腸道病毒通用核酸檢測試劑盒盒Stanolone5218雄諾龍

*大腸桿菌0157：H7核酸檢測試劑盒盒Sprengerinin C888611

乙型腦膜炎病毒核酸檢測試劑盒盒Sprengerinin A888669

恙蟲病東方體核酸檢測試劑盒盒Spongouridine837阿糖尿苷
Humanoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit 人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone  中文名：  分子式：C24H32O7  度：98.0%

Humanneuronalnuclearaoaibody,ANNA-2/RiELISAKit 人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  (S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  中文名：(S)-(+)-4-芐基-3-丙酰-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3  度：98.0%

Humanneuronalnuclearaoaibody,ANNA-1/HuELISAKit 人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,18-Octadecanediol  中文名：  分子式：C18H38O2  度：90.0%

Humanneuophilelastase,NEELISAKit 人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  11α-Hydroxycanrenone  192569-17-8  中文名：  分子式：C22H28O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

Humanmyeloperoxidase,MPOELISAKit 人髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  17-Ethylendioxyandrosta-1,4-dien-3-one  2398-63-2  中文名：17-亞乙二氧基-雄-1,4-二烯-3-酮  分子式：C21H28O3  度：95.0%
烏藥醚內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Linderane  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激肽釋放酶3(KLK3)ELISA試劑盒 ，英文名： KLK3 ELISA Kit

D(十)-無水葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)  D(+)-Glucose  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒 ，英文名： KLK4 ELISA Kit

吳茱萸堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Rutaecarpine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激肽釋放酶5(KLK5)ELISA試劑盒 ，英文名： KLK5 ELISA Kit

吳茱萸堿  Rutaecarpine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠激肽釋放酶7(KLK7)ELISA試劑盒 ，英文名： KLK7 ELISA Kit

吳茱萸堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Evodiamine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠激肽原1(KNG1)ELISA試劑盒 ，英文名： KNG1 ELISA Kit

吳茱萸堿  Evodiamine  質(zhì)量規(guī)格：≥98%(T)，BR 小鼠極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒 ，英文名： VLDL ELISA Kit

五味子丙素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Schisandrin C  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒 ，英文名： VLDLR ELISA Kit

五味子醇甲(標(biāo)準(zhǔn)品)  Schisandrol A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠幾丁質(zhì)酶1(CHIT1)ELISA試劑盒 ，英文名： CHIT1 ELISA Kit

五味子醇乙（標(biāo)準(zhǔn)品）  Schisandrol B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠己糖激酶(HK)ELISA檢測試劑盒MouseHexokinase,HKELISAKit 96T/48T

五味子甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Schizandrin A  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒 ，英文名： HK ELISA Kit
大鼠食管上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)人單胺氧化酶(MAO)ELISAKit                 Timosaponin B-II  136656-07-0  中文名：知母皂苷B-II  分子式：C45H76O19 

人補(bǔ)體因子4(C4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human C4 (Compleme Compone 4) ELISA Kit  3,6'-Disinapoylsucrose  中文名：3,6'- 二芥子?；崽?/span>  分子式：C34H42O19  度：98.0%

人表皮轉(zhuǎn)谷酰胺酶(TGM3)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human TGM3 (ansglaminase 3, Epidermal) ELISA Kit  3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan  915095-94-2  中文名：  分子式：C17H16ClIO2 

人白介素27(IL-27)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human IL-27 (Ierleukin 27) ELISA Kit  3-[2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-3-quinolinyl-2-propenal  中文名：  分子式：C21H16FNO  度：98.0%

人α2巨球蛋白elisa試劑盒   人α2巨球蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人α2巨球蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人α2巨球蛋白試劑盒、人α2巨球蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     5-Ami-(2-hydroxyethyl)pyrazole  中文名：  分子式：C5H9N3O

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。