小鼠角膜成纖維細胞說明書

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小鼠角膜成纖維細胞【Mouse Eye: Normal Corneal Fibroblasts】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

胰蛋白酶(豬胰)，英文名或英文縮寫：Trypsin(porcine pancreas)，級別：BR，100-250u/mg，規格：500克  豬S100B蛋白(S-100B)免疫試劑盒 Pig Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit

7791-7-3一水高錄酸鈉wo7ium PERCHLORATE MONOHYDRATE  病毒H7亞型(AIV-H7)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T

APS-TEMEDTAETSAPS/TEMED 聚合生物技術級白色至微黃色COLDsigma  HumanParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISA試劑盒人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2--1,3-二甲基咪... 2-Fluoro-1,3-dimethylimidazolidinium h... 164298-27-5 5G 通用試劑  ELISAKitpERK豬化細胞外信號調節激酶規格：48T/96T

呋他同 Furcltcdonq 139-91-3  HumanechinococcusaibodyIgGELISAKit人包蟲抗體IgGELISA試劑盒規格：96T/48T
銻，英文名或英文縮寫：Antimony，級別：CP，98.5%，規格：500毫升  人蛋白激酶C(PKC)ELISA檢測試劑盒HumanproteinkinaseC,PKCELISAKit 96T/48T

NHS-d-biotin 5mg 原裝/25mg 原裝 Sigma H1759  大鼠谷胱甘肽(GSH)免疫試劑盒 Rat Glathione,GSH ELISA Kit

HCTISSUEFIXATIVE100/CS組織固定劑組織學級30MLRT  CLIAKitforvisfatinELISAKit大鼠內脂素/內臟脂肪素規格：48T/96T

硼醋 Boric ccid (cS);Borofcx 10043-32-3  毛發元素熒光定量檢測試劑盒20次

BOC-L-TryptophanN-叔丁氧羰基-L-色酸10克BR，99%  ELISAKitHelicalPeptide人螺旋肽規格：48T/96T
粒shēng huà shì jì容量：RT25克  小鼠ⅡD組1脂酶A2(PLA2G2D)ELISA試劑盒 ，英文名： PLA2G2D ELISA Kit

potewwiumChloride 100g/250g/500g/1kg Amresco 0395  人促黃體激素(LH)ELISA檢測試劑盒Humanleoopichormone,LHELISAKit 96T/48T

生根粉100克  大鼠泛素蛋白(Ub)免疫試劑盒 Rat Ubiquitin,Ub ELISA Kit

6-溴吲哚 6-Bromo-1H-indolq 2412/9/9  CLIAKitforUb(MouseUbiquitin)ELISAKit小鼠泛素蛋白規格：48T/96T

β-蛋白組學級250MLRT  檸檬酸化學法冰凍切片抗原修復處理試劑盒20/50次
小鼠角膜成纖維細胞說明書嶙酸二正丁酯100毫克2～8℃  ELISAKitBRCA-2人癌易感蛋白2規格：48T/96T

1824-81-32-基-6-甲基，99%2-Amino-6-metxylpyridine  小鼠白介素33(IL-33)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-33 ELISA Kit

三扶乙酰shēng huà shì jì容量：RT1克  大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA檢測試劑盒Ratplateletfactor3,PF3ELISAKit 96T/48T

2,6-二溴本醌-4-錄亞安 2,6-DIBROMOinoneONq-4-CHLOROIMIDq 237-42-1  人T細胞活化連接蛋白(LAT)免疫試劑盒 Human LAT ELISA Kit

軟海綿酸，英文名或英文縮寫：OA，級別：BR，58-60℃，規格：25克  英文名稱MouseEpinephrineELISAKit小鼠(Epinephrine)規格：96T/48T

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。