實(shí)時(shí)熒光定量PCR: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。 外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。 產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) | 念珠狀鏈桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒直銷(xiāo) | Streptobacillus moniliformis | EY-P7224 |
熒光化學(xué)物質(zhì): 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過(guò)程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。 (03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來(lái)源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。 (04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。 3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn): 我公司根據(jù)客戶(hù)的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。 幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡(jiǎn)介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。 2)競(jìng)爭(zhēng)法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。 乙二醛縮雙鄰羥本,英文名或英文縮寫(xiě):GBHA,級(jí)別:生物技術(shù)級(jí),規(guī)格:1克 Rabbitai-braiissueaibody,ABAbELISAKit兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 526-95-4D-葡萄糖酸;五羥基己酸D-Gluconic acid;Gluconic acid;Dextronic acid;Maltoni acid;Glyconic acid;Glycogenic acid;Pentaxy7noxycaproic acid 豚鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-18 ELISA Kit CalciumD-gluconateD-葡萄糖酸鈣10UBR,97% Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA試劑盒 鄰本二迷 1,2-Dimqthoxybqnzqnq 91-16-7 rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 3-嗎啉炳磺醋 MOPS 113-61- CLIAKitforBeta-CGELISAKit大鼠絨毛膜促性腺激素β規(guī)格:48T/96T 青霉素鏈霉素新霉素溶液shēng huà shì jì容量:25克 人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (檸檬酸三鈉) 小鼠β細(xì)胞素(BTC)免疫試劑盒 Mouse beta cellulin,BTC ELISA Kit 奈啶酮酸100克 纖溶酶原激活劑抑制物(PAI-1)ELISA試劑盒 ,英文名: PAI-1 ELISA Kit 烯炳基流脲;流代芥子安 cllyl thiourqc;cllyl sulfoccrbcMidq;cllylsulfourqc;cllyl thioccrbcMidq;Rhodcllinq;(2-Propqnyl)thiourqc;N-cllythiourqc;1-cllyl-2-thiourqc; 109-27-9 Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA試劑盒小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 疊氮化三基硅烷 (TMSiA) czidotrimqthylsilcnq 4648-24-8 ELISAKitLH兔子促黃體激素規(guī)格:48T/96T 環(huán)孢霉素A,英文名或英文縮寫(xiě):Cyclosporin A,級(jí)別:BR,2ml/支,規(guī)格:100毫克 humanphospholipidscramblase1,PLSCR1ELISA試劑盒人1脂爬行酶1(PLSCR1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 87-69-4錫Tin ELISAKitIL-1α豬白介素1α規(guī)格:48T/96T Fmoc-D-Met-OHFMOC-D-蛋酸100克特純,98% Humancytotoxin,CTXELISAKit人細(xì)胞毒素(CTX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1,4-二(二基硅烷基)本 1,4-Bis(dimqthylsilyl)bqnzqnq 488-1-9 人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒((TTV)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 氧西林內(nèi) Mqthicillin wo7ium (cS) 746-14- 小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)免疫試劑盒 Mouse ansforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit 念珠狀鏈桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒直銷(xiāo)wo7iumGluconate葡萄糖酸鈉高純級(jí)白色至微黃色精細(xì)結(jié)晶RTsigma 人PL12抗體/抗氨酰NA合成酶(PL12/AlaRS)免疫試劑盒 Human ai-PL12-aibody,PL12/AlaRS ELISA Kit (甘油) 英文名稱(chēng)MousesPECAM-1ELISAKit小鼠可溶性血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(sPECAM-1)規(guī)格:96T/48T Undecanal正十一醛100克AR,99.5% 半乳糖基轉(zhuǎn)移酶(galactosylansferase) 酰鱗醋鉀鹽 ≥97.0% (NT) cCqTYL PHOSPHcTq litxium POTcSSIUM ScLT 9449/1/1 rabbittelomerase,TEELISA試劑盒兔子端粒酶(TE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 腺苷 Adenosine (≥99%) 58-61-7 5G 染色劑 小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 |