PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細胞試劑盒培養

PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

英文名稱HumapPELISAKit人血栓前體蛋白(TpP)規格：96T/48T  911819-08-4OphiopojaponinC  Ophiopojaponin C

化線粒體蛋白質濃度定量測定試劑盒20  19885-10-0澤瀉醇A說明書  Alisol A

RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T  18674-16-3澤瀉醇A-24-醋酸酯品牌  Alisol A 24-acetate

小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA試劑盒 ，英文名： REG-1a ELISA Kit  17306-46-6野漆樹苷規格  Rhoifolin

小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測試劑盒MousecoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T  122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯  paederosidic acid methyl ester
2009-24-7花椒毒酚規格  Xanthotol   英文名稱RatNN-T4ELISAKit大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)規格：96T/48T

20086-06-0黃獨素B品牌  Diosbulbin B   英文名稱RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)規格：96T/48T

20086-06-0黃獨素B規格  Diosbulbin B    英文名稱RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)規格：96T/48T

19908-48-6高麗槐素品牌  Maackiain   英文名稱RatNF-kBELISAKit大鼠NF-kB規格：96T/48T

19906-72-0蜂斗菜內酯說明書  Bakkenolide   英文名稱RatneuropeptideYELISAKit小鼠神經肽(NPY)規格：96T/48T
小鼠轉錄激活因子5(ATF5)ELISA試劑盒 ，英文名： ATF5 ELISA Kit  66575-29-9佛司可林規格  Forskolin

犬雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒CanineEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T  29070-92-6茯苓酸  Pachymic acid

犬胸腺基質細胞生成素(TSLP)試劑盒 Dog TSLP ELISA Kit  303-98-0輔酶Q10說明書  Coenzyme Q10

英文名稱Humaissue-typePlasminogenActivator(t-PA)ELISAkit人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒規格：96T/48T  58749-22-7甘草查爾酮A品牌  Licochalcone A

*AP酶聯檢測封閉溶液10毫升  58749-23-8甘草查爾酮B規格  Licochalcone B
PrimaCell™大鼠子宮平滑肌細胞試劑盒培養6812-81-3櫟癭酸規格  Roburic acid   組蛋白H3-S311酸化檢測試劑盒10/20等

6807-83-6三葉豆紫檀苷品牌  Trifolirhizin  組蛋白H3-S281酸化檢測試劑盒10/20等

6807-83-6三葉豆紫檀苷  Trifolirhizin   組蛋白H3-S101酸化檢測試劑盒10/20等

68027-15-64補充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside   組蛋白H3-K9甲基化共沉淀分析試劑盒5

67979-25-3橙黃決明素品牌  Aurantio-obtusin   組蛋白H3-K9(mono/di/i)甲基化檢測試劑盒10/20等

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。