人表皮黑色素細胞提取物培養(yǎng)

人表皮黑色素細胞提取物【Human Skin: Normal Melanocytes Cells Derivatives】

人表皮黑色素細胞提取物是從人原代表皮黑色素細胞提取的，人原代表皮黑色素細胞從正常人表皮黑色素組織制備。正常人表皮黑色素組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

炔諾酮殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Ciprofloxacin hydrochloride9378鹽酸環(huán)丙沙星

青霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cinobufagin47華毒基

卡那霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cinnamyl 3-aminobut-enoate1138987

己烯雌酚殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cilnidipine132西尼地平

紅霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cialis1715969西力士
Methyl 4-O-feruloylquinate  195723-10-5  中文名：  分子式：C18H22O9  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  莽草酸; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠維生素D(VD)ELISA試劑盒  

Methyl 4'-methylbiphenyl-2-carboxylate  114772-34-8  中文名：  分子式：C15H14O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒           

Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate  114772-38-2  中文名：  分子式：C15H13BrO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素B6(VB6)ELISAKit  

Methyl 3-cyclopropyl-3-oxopropionate  32249-35-7  中文名：  分子式：C7H10O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit  

Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit
鹽酸平陽霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Bleomycin A5 Hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測定 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 96T/48T

琥乙紅霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Erythromycin ethylsuccinate  質(zhì)量規(guī)格：雜質(zhì)檢查 小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒 ，英文名： GP-MM ELISA Kit

灰黃霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Griseofulvin  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA檢測試劑盒Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 96T/48T

Tivantinib(ARQ197)  Tivantinib, ARQ 197  質(zhì)量規(guī)格：>98%，c-Met抑制劑 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒 ，英文名： GSK ELISA Kit

3-乙氧基－4－羥基（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ethyl vanillin  質(zhì)量規(guī)格：系統(tǒng)適應(yīng)性 小鼠糖原合酶激酶3α(GSK3α)ELISA試劑盒 ，英文名： GSK3α ELISA Kit

（標(biāo)準(zhǔn)品）  2-Phenylacetamide  質(zhì)量規(guī)格：系統(tǒng)適應(yīng)性 小鼠套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒 ，英文名： iNV ELISA Kit

依諾沙星(標(biāo)準(zhǔn)品）  Enoxacin  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒 ，英文名： TGSF ELISA Kit

[Nle4,DPhe7] a-促黑激素酰胺; 美拉諾坦 I  [Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TSGF)ELISA檢測試劑盒MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TSGFELISAKit 96T/48T

[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺激素(1-34) 酰胺 (牛)  [Nle8’18,Tyr34]-pTH (1-34) amide (bovine)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TSGF)ELISA試劑盒 ，英文名： TSGF ELISA Kit

[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺激素(3-34) 酰胺(牛)  [Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠天冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 ，英文名： AST ELISA Kit
人表皮黑色素細胞提取物培養(yǎng)α-Spinasterol  481-18-5  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 栝樓; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lipoic acid  1077-28-7  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗核抗體(mouse ANA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

α-Lapachone  4707-33-9  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  萘醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠緊張素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

α-D-Glucose  492-62-6  中文名：α-D-葡萄糖  分子式：C6H12O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脂肪酸合成酶   英文名稱：   Mouse Fatty Acid Syhase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FAS

    中文名：佐匹克隆  分子式：C17H17ClN6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠促卵泡生成激素   英文名稱：   Mouse Follicle Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FSH