大鼠食管組織提取物培養(yǎng)

大鼠食管組織提取物【Rat Esophagus: Normal Esophageal Derivatives】

食管為前、后扁窄的肌性管道，按其行程可分為頸部、和腹部三部。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍大鼠食管組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

Casein enzymatic hydrolysate酶水解酪蛋白   0g2,2-Bis(4-chlorophenyl),1-dichloroethylene7252,2-雙(4),1-二氯乙烯

Casein 酪蛋白   0g 2,2-Bis(4-chlorophenyl),1-dichloroethane7242,2-雙(4-氯),1-二氯乙烷

CDP 5’-二磷酸胞苷鈉鹽水合物   mg2,2-Bis(4-chloroformyloxyphenyl)propane2482,2-雙(4-氯甲酰氧苯基)丙烷

Cefotaxime  Salt噻孢霉素鈉鹽/頭孢噻肟鈉鹽   5g /25g /g 2,2-Bis(3-amino-hydroxyphenyl)hexafluoropropane8355872,2-雙(3-氨基-羥苯基)六氟丙烷

CHAPS   1g/5g2,2'-Biquinoline11912,2'-聯(lián)
Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2  度：98.0%  肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白 A(SP-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Cefotaxime   中文名：頭孢噻肟鈉  分子式：C16H17N5NaO7S2  度：98.0%  胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子 (TARC)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Triamcinolone acetonide  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  胸腺表達(dá)化學(xué)因子 (TECK)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝   

Tryptophan  中文名：  分子式：C11H12N2O2  度：98.0%  酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣

4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine  中文名：  分子式：C7H9Cl2N3S  度：98.0%  脫羧酶（PDC）試劑盒   紫外分光光度法    50管/48樣
木栓酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  FRIEDELIN  質(zhì)量規(guī)格：鑒別 小鼠斯鈣素1(STC1)ELISA試劑盒 ，英文名： STC1 ELISA Kit

表木栓醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  FRIEDELAN-3BETA-OL  質(zhì)量規(guī)格：鑒別 小鼠死亡關(guān)聯(lián)蛋白激酶1(DAPK1)ELISA試劑盒 ，英文名： DAPK1 ELISA Kit

老龍皮酸；網(wǎng)脊衣酸 A（標(biāo)準(zhǔn)品）  (4S)-2α,3β-Dihydroxy-D:C-friedo-B':A'-neogammacer-9(11)-en-23-oic acid  質(zhì)量規(guī)格：鑒別用 小鼠死亡關(guān)聯(lián)蛋白激酶3(DAPK3)ELISA試劑盒 ，英文名： DAPK3 ELISA Kit

焦性沒(méi)食子酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pyrogallol  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠四旋蛋白30(TSPAN30)ELISA試劑盒 ，英文名： TSPAN30 ELISA Kit

正十九烷（標(biāo)準(zhǔn)品）   N-NONADECANE   質(zhì)量規(guī)格：內(nèi)標(biāo) 小鼠松弛肽(RLN)ELISA試劑盒 ，英文名： RLN ELISA Kit

正十五烷（標(biāo)準(zhǔn)品）  N-PENTADECANE  質(zhì)量規(guī)格：內(nèi)標(biāo) 小鼠速激肽受體1(TACR1)ELISA試劑盒 ，英文名： TACR1 ELISA Kit

咖啡酸乙酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  ETHYL CAFFEATE  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠速激肽受體2(TACR2)ELISA試劑盒 ，英文名： TACR2 ELISA Kit

檸檬酸無(wú)水  Citric acid  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 小鼠酸激酶(PK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

檸檬酸無(wú)水（標(biāo)準(zhǔn)品）  Citric acid  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠酸激酶(PK)ELISA試劑盒 ，英文名： PK ELISA Kit

硫酸鉀（標(biāo)準(zhǔn)品）  Potassium sulfate   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒 ，英文名： M2-PK ELISA Kit
大鼠食管組織提取物培養(yǎng)豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2-Acetylbutyrolactone  中文名：2-乙酰基丁內(nèi)酯  分子式：C6H8O3  度：98.0%

豚鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit  2-Acetyl-6-methoxynaphthalene  3900-45-6  中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘  分子式：C13H12O2  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

豚鼠白介素10(IL10)ELISA試劑盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit  2-Acetyl-1H-Isoindole-1,3(2H)-Dione  中文名：2-乙酰基-1H-異吲哚-1,3(2H)-二酮  分子式：C10H7NO3  度：93.0%

豚鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-1 ELISA Kit  2-Acetonaphthone  1993/8/3  中文名：2'-萘乙酮  分子式：C12H10O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豚鼠白蛋白(ALB)ELISA試劑盒 ，英文名： ALB ELISA Kit  2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose  中文名：N-乙酰氨基葡萄糖  分子式：C8H15NO6  度：99.0%

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。