大鼠腸上皮細胞提取物培養(yǎng)

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大鼠腸上皮細胞提取物【Rat Intestine: Normal Intestinal Mucosa Epithelial Cell Derivatives】

大鼠腸上皮細胞提取物是從大鼠腸上皮細胞提取的，大鼠腸上皮細胞從正常大鼠腸組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

甲硝唑 ELISA試劑盒96TN4-Benzoylcytosine266613N4-苯甲酰基胞嘧啶

潑尼松龍 ELISA試劑盒96TN4-Benzoylcytidine1898N4-苯甲酰胞苷

阿苯達唑 ELISA試劑盒96TN4-Benzoyl'-deoxycytidine48363N4-苯甲酰基'-脫氧胞苷

頭孢哌酮 ELISA試劑盒96TN1-Methyl-nitrobenzene,2-diamine419391

巴氏消毒 ELISA試劑盒96TN-[Bis(methylthio)methylene]- p-sulfonamide26515N-[雙(甲硫基)亞甲基]對甲苯磺酰胺
HumanHeatShockProtein60,HSP-60ELISAKit 人熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole  13369-74-9  中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑  分子式：C8H12N2  度：98.0%  關鍵詞： 

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  2-Amino-5-chlorobenzophenone  719-59-5  中文名：2-氨基-5-氯二苯甲酮  分子式：C13H10ClNO  度：99.0%  關鍵詞： 

HumanFructose-1,6-bisphosphatealdolase,FDAELISAKit 人果糖1,6二0酸縮酶(FDA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  1,4-Bis(2-benzoxazolyl)naphthalene  中文名：1,4-雙(2-苯并惡唑基)萘  分子式：C24H14N2O2  度：98.0%

HumanExactablenucleraigen,ENAELISAKit 人可提取核抗原(ENA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  1-Methyl-L-4,5-dihydroorotic acid  103365-69-1  中文名：1-甲基-L-4,5-二氫乳清酸  分子式：C6H8N2O4  度：98.0%  關鍵詞：  

Humanepidermalbasememembranezone,EBMZELISAKit 人抗表皮細胞基底膜抗體(EBMZ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  (2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester  中文名：  分子式：C11H15NO3  度：98.0%
維生素B HPLC≥99% 20mg Humanconnectivetissue-activatingpeptideⅢ,CTAPⅢELISAKit 人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素B HPLC≥99% 20mg HumanCreatineKinase,CKELISAKit 人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素B HPLC≥99% 20mg HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 人C型尿肽(CNP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素B HPLC≥99% 20mg HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISA試劑盒人C型尿肽(CNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

維生素B HPLC≥99% 20mg HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素C HPLC≥99% 20mg Humancytomegalovirus(HCMV)RFLP基因分析試劑盒20

維生素D HPLC≥99% 20mg Humandecay-acceleratingfactor,DAFELISAKit 人降解加速因子(DAF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素D HPLC≥99% 20mg Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit 人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素E HPLC≥98% 20mg Humandeoxyribonucleicproteinaibody,DNP-AbELISAKit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

維生素K HPLC≥99% 20mg HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit 人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
大鼠腸上皮細胞提取物培養(yǎng)人結腸癌抗原(CCA)ELISAKit     3-(Boc-Amino)piperidine  309956-78-3  中文名：  分子式：C10H20N2O2 

人堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISAKit     2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  中文名：  分子式：C19H14FNO  度：98.0%

人堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISAKit                 2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  中文名：  分子式：C19H14FNO 

人基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISAkit     2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2 

人基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISAKit     Tigecycline  220620-09-7  中文名：  分子式：C29H39N5O8  度：98.0%  關鍵詞：

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。