小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞

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小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞【Mouse Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

銥粉shēng huà shì jì容量：5克  Humaestoteronerecepter,ELISA試劑盒人睪同受體()ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(牛血清白蛋白)  ELISAKitPEDF小鼠色素上皮衍生因子規(guī)格：48T/96T

TURBONEXTGEL12.5%Turbo NEXT膠,12.5%蛋白組學(xué)級(jí)500MLRT  HumanAquaporin3,AQP-3ELISAKit人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

安鱗汀二流化物 cMifostinq Disulfidq 1007-62-3  人卵巢癌抗原(CA125)ELISA試劑盒 組裝/原裝

鱗醋輕二鉀 Dibcsic PotcssiuM Phosphctq (cS) 7728-11-4  小鼠能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒 Mouse adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit
糖元三型，英文名或英文縮寫：Glycogen from rabbit liver，級(jí)別：超純，98%，規(guī)格：5克  HumanfibrinopeptideA,FPAELISAKit人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

139177-64-3三扶磺酸鉺ERBIUM (III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE  牛β羥(βOHB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

MINERALOIL石蠟油無色油狀液體RTsigma  人中性粒細(xì)胞抗體(ANA)免疫試劑盒 Human ai-neuophil aibody,ANA ELISA Kit

3-溴 3-Bromo,97% 3132-99-8 25G 通用試劑  化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA試劑盒 ，英文名： pAMPK ELISA Kit

組胺/組胺鹽/二組織胺/Histamine diphospate BR，98% 5克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口  Ratcalcineurin,CaNELISA試劑盒大鼠鈣調(diào)酶(CaN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)50張/盒  rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Urea 250g/500g/1kg/5kg 原裝 Sigma U0631  CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B細(xì)胞淋巴瘤因子2規(guī)格：48T/96T

酚番紅花紅shēng huà shì jì容量：500u  纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

4-安基派啶 4-cminopipqridinq 13032-19-3  RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

對(duì)胺shēng huà shì jì容量：100克  豚鼠血管生成素2(ANGPT2)ELISA試劑盒 ，英文名： ANGPT2 ELISA Kit
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞說明書嶙酸二丁酯，英文名或英文縮寫：Dibutyl phosphate，級(jí)別：AR，97%，規(guī)格：250克  載脂蛋白C2(Apo-C2)ELISA試劑盒 ，英文名： Apo-C2 ELISA Kit

(可溶性兩性霉素B)  Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISA試劑盒人α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-(Chlorometxyl)-4-(4-nitnopxenyl)-1,3-thiazole黃氏多糖20次/200ul/支CP，30%  ELISAKitMMP-10小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10規(guī)格：48T/96T

無水流醋鈷 Cobclt sulfctq 1014-43-3  HumanAlpha1Aichymoypsin,AACTELISAKit人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PNP-Nag4-硝基本-N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷1公斤超純，80%  人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。