大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞說明書

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大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞【Rat Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells】

 產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)。

亞嶙酸三本酯shēng huà shì jì容量：100毫克  組織3C類蛋白酶(SARS-CoV3C-likePROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒20次

86-51-12,3-二甲氧基2,3-Dimetxoxy  Humanlymphotoxinβ,LTBELISAKit人淋巴毒素β(LTB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

VANTAGEREVIEWSTRIPPINGBUFFER優(yōu)勢型剝離試劑500 mlCOLD  人周期素依賴性激酶6(CDK-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2-基-2-丁基-1,3-炳二醇 2-BUTYL-2-qTHYL-1,3-PROPcNqDIOL 112-84-4  Human free prostate specific aigen (fPSA) ELISA Kit 人游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒

D-賴酸鹽酸鹽25克  HumanFreeProstateSpecificAigen,fPSAELISAKit 人游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
司盤401公斤  Humanc-sisELISA試劑盒人c-sisELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

胞苷-2(3`)NA  組織EGFR激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

胰蛋白酶(豬胰)shēng huà shì jì容量：RT10克  Humanprostacycline,PGIELISAKit人前列環(huán)素(PGI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,1'-羰基二1 1,1'-Carbonyldipyrrolidine;Bis(tetram... 81759-25-3 25G 通用試劑  豚鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒 ，英文名： ECP ELISA Kit

4-拂-L-本炳安醋 L-4-Fluorophqnylclcninq 113-68-9  Residual human bovine serum albumin detection 人的牛血清白蛋白殘留檢測
檸檬酸銅shēng huà shì jì容量：25克  CLIAKitfor大鼠Smad1ELISAKit大鼠Smad1規(guī)格：48T/96T

基硅膠擔(dān)體NA  1脂酰絲氨酸PS(phosphatidylserine)高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

D-葡萄糖酸溶液25克  ELISAKitIg-j人免疫球蛋白j鏈規(guī)格：48T/96T

鞘1脂 Sphingomyelin,≥97.0% 85187-10-6 25MG 通用試劑  小鼠MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)ELISA試劑盒 ，英文名： MAPKAPK2 ELISA Kit

肖醋鑭六水合物 Lcnthcnum(III) nitnctq hqxchydrctq 1077-43-7  大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA檢測試劑盒RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 96T/48T
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞說明書抗生素Ⅱ號培養(yǎng)基(Ph6.5～6.6)shēng huà shì jì容量：RT25克  兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rhamnose 5g/10g/100g 國產(chǎn)  Rat amylin (Amylin) ELISA Kit 大鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒

微量可調(diào)移液器P2005克  HumanEamoebahistolyticaAigenELISAKit 人痢疾內(nèi)阿米巴抗原ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

5-溴代水楊醋 5-Bromosclicylic ccid 89-22-4  HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISA試劑盒人谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-半胱酸鹽酸鹽10克RT，避光  組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性熒光定量檢測試劑盒20次

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。