PrimaCell™小鼠肺泡上皮細胞試劑盒培養

PrimaCell™小鼠肺泡上皮細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒規格：96T/48T  54522-52-0甲基原薯蕷皂苷  Methyl protodioscin

載玻片細胞INSULIN蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  77-60-1劍麻皂苷元說明書  Tigogenin

Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISA試劑盒人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒規格：96T/48T  458-37-7姜黃素品牌  Curcumin

小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit  122-48-5姜酮規格  Zingerone

小鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA檢測試劑盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 96T/48T  94987-08-3絞股藍皂苷XLIX  Gypenoside XLIX
552-66-9大豆苷品牌  Daidzin   豬血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)試劑盒 Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit

552-59-0櫻黃素說明書  Prunetin  豬血管內皮細胞生長因子(VEGF)試劑盒 Pig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT

552-59-0櫻黃素  Prunetin  豬血管內皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)試劑盒 Pig Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol   豬血管內皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)ELISA檢測試劑盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol  豬血管緊張素轉化酶2(ACE2)試劑盒 Pig Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
犬β內啡肽(β-EP)ELISA檢測試劑盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香腦品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)試劑盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己諾林堿規格  Fangchinoline

英文名稱HumaissuefactorELISAKit人組織因子(TF)ELISA試劑盒規格：96T/48T  518-34-3粉防己堿  Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物顯色試劑盒10/50  19906-72-0蜂斗菜內酯說明書  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA試劑盒大鼠內源性糖皮質激素(GC)ELISA試劑盒規格：96T/48T  484-20-8佛手柑內酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
PrimaCell™小鼠肺泡上皮細胞試劑盒培養3,6′-二芥子酰基蔗糖品牌  3, 6′-Disinapoyl Sucrose   英文名稱谷氨酸脫羧酶抗體規格：96T/48T

3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮規格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone   英文名稱U.S.Salmon.CT.ELISAKit超級鮭魚(U.S.Salmon.CT.)規格：96T/48T

29956-99-8氯化天竺葵素  Di-tert-octyl Disulfide    英文名稱TIMP-1金屬蛋白酶組織抑制因子-1規格：96T/48T

299-39-8硫酸司巴丁  Sparteine sulfate   英文名稱ThromboxaneB2人血栓素(TXB2)規格：96T/48T

29883-15-6苦杏仁苷說明書  Amygdalin  英文名稱TGF-β1轉移生長因子-β1規格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。