大鼠肺成纖維細胞提取物

大鼠肺成纖維細胞提取物【Rat Lung: Normal Lung Fibroblast Derivatives】

大鼠肺成纖維細胞提取物是從大鼠肺成纖維細胞提取的，大鼠肺成纖維細胞從正常大鼠肺組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

脊髓灰質(zhì)炎病毒2型單重熒光PCR檢測試劑盒48Sitagliptin phosphate6546718無水磷酸西他列汀

脊髓灰質(zhì)炎病毒3型單重熒光PCR檢測試劑盒484-Difluoromethoxy-hydroxybenzaldehyde15138

小雙節(jié)RNA病毒單重熒光PCR檢測試劑盒483-Cyclopropylmethoxy-difluoromethoxybenzoic acid16212

甲型肝炎（HAV）病毒單重熒光PCR檢測試劑盒485-Chloro-nitrobenzoic acid25165

腸道病毒通用（EV-U）單重熒光PCR檢測試劑盒482-Methyl-nitrobenzoic acid19751
humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember12,EAR12ELISA試劑盒人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO 

humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember1,EAR1ELISA試劑盒人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員1(EAR1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (1R,2S)-2-Ami,2-diphenylethanol  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO 

Humanenkephalin,ENKELISA試劑盒人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  131685-53-5  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙酰基-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3 

Humanendotoxin,ETELISA試劑盒人內(nèi)(ET)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  中文名：(R)-(+)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚  分子式：C20H14O2 

humanEndothelin1,ET-1ELISA試劑盒人內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone  102029-44-7  中文名：(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮  分子式：C10H11NO2
外消旋心得安-d7  rac Propranolol-d7  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatVWFELISAKit大鼠血管性血友病因子(VWF)規(guī)格：96T/48T

5-羥基鹽酸心得安  5-Hydroxy Propranolol Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱Ratβ-HCGELISAKit大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)規(guī)格：96T/48T

(R)-4-羥基鹽酸心得安  (R)-4-Hydroxy Propranolol Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱Ratβ-HCGELISAKit大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)規(guī)格：96T/48T

(S)-4-羥基鹽酸心得安  (S)-4-Hydroxy Propranolol Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RvatPhospholipidaseA2elisakit大鼠0脂酶A2(sPLA2)規(guī)格：96T/48T

(+/-)-4-羥基鹽酸心得安  (+/-)-4-Hydroxy Propranolol Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RvatPhospholipidaseA2elisakit大鼠0脂酶A2(sPLA2)規(guī)格：96T/48T

(+/-)-4'-羥基硫酸心得安  (+/-)-4'-Hydroxy Propranolol Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱TGF-β1轉(zhuǎn)移生長因子-β1規(guī)格：96T/48T

4-羥基心得安β-D-葡萄糖苷酸   4-Hydroxy Propranolol β-D-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱ThromboxaneB2人血栓素(TXB2)規(guī)格：96T/48T

S(-)-鹽酸心得安  S(-)-Propranolol • HCl  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱TIMP-1金屬蛋白酶組織抑制因子-1規(guī)格：96T/48T

雷洛昔芬-d4  Raloxifene-d4  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱谷氨酸脫羧酶抗體規(guī)格：96T/48T

雷洛昔芬6-葡萄糖苷酸  Raloxifene 6-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱核糖體、P抗體、IgG/M/A規(guī)格：96T/48T
大鼠肺成纖維細胞提取物人抗糖蛋白抗體(GP)ELISAKit     Timosaponin AIII  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13 

人抗鼠抗體(HAMA)ELISAKit     3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  85175-59-3  中文名：  分子式：C15H18ClNO3 

人抗鼠抗體(HAMA)ELISAKit     3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  中文名：  分子式：C11H13N3S  度：98.0%

人抗人類缺陷病毒抗體(HIV)ELISAKit     3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride  2421-28-5  中文名：3,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐  分子式：C17H6O7 

人抗繆勒管激素(AMH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human AMH (Ai-Mullerian Hormone) ELISA Kit                   2-Hydroxytetracosanoic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C26H52O3