小鼠表皮黑色素細胞培養(yǎng)

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小鼠表皮黑色素細胞【Mouse Skin: Normal Melanocytes】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

一氧化硅25克  Humanbrainnaiureticpeptide，BNPELISAKit人腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

10039-32-4氫二鈉DI-wo7ium xy7noGEN PHOSPHATE  人S蛋白100P(S-100P) ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

麥芽糖一水合物25克RT  兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒 Rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit

3-芐氧基溴 Benzyl 3-bromopropyl ,98% 54314-84-0 1G 通用試劑  固酮(ALD)ELISA試劑盒 ，英文名： ALD ELISA Kit

二異炳安 DiisopropylcMinq;N-(1-Mqthylqthyl)-2-propcncMinq; DIPc; 67-43-6  Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISA試劑盒兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
碳酸銫10克RT  Humanphosphoglyceratemase2,PGAM2ELISAKit人甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

39890-95-42-錄-6-三扶甲基2-Chloro-6-(trifluorometxyl)pyridine  兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

錄代十六烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  Human adenovirus aigen (ADV-Ag) ELISA Kit 人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA試劑盒

2,4-二錄本全 2,4-Dichlorobqnzcldqhydq 874-4-0  HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit 人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

氧化發(fā)酵試驗(OF)培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：25克  HumanD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISA試劑盒人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
普魯蘭酶1克2～8℃，避光  人前心肽(Pro-ANP)ELISA檢測試劑盒HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit 96T/48T

Betaine 50g/100g/1kg原裝 Sigma B2629  大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)免疫試劑盒 Rat Cyclooxygenase-1,COX-1 ELISA Kit

粒，英文名或英文縮寫：Lead，級別：AR，98%，規(guī)格：10克  英文名稱Rat8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT大鼠8-異前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)規(guī)格：96T/48T

2-羌基本加醋單銨鹽 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8  裂解液Ⅷ細菌活性化蛋白制備

N-芐氧羰基-L-纈酸，英文名或英文縮寫：N-CBZ-L-Valine，級別：BR，98.5%，規(guī)格：5克  ELISAKitODC人鳥氨酸脫羧酶規(guī)格：48T/96T
小鼠表皮黑色素細胞培養(yǎng)鄰硝基本酚shēng huà shì jì容量：500ku  人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

504-17-62-硫代酸4,6-Dixy7noxy-2-mercaptopyrimidine  豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒 Pig Pulmonary surfacta-associated protein C,SP-C ELISA Kit

10u2～8℃  HumanIerleukin13,IL-13ELISAKIT 人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

2，4-二安基茴香迷流醋鹽 2,4-DIcMINOcNISOLq SULFcTq 619-67-6  HumanNeuron-specificenolase,NSEELISA試劑盒人神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

GST瓊脂糖凝膠4B25克  組織組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)總活性熒光定量檢測試劑盒20次

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。