PrimaCell™小鼠肺大動脈平滑肌細胞試劑盒

PrimaCell™小鼠肺大動脈平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

人抗SSA/Ro抗體 試劑盒 Human ai-SSA/Ro aibody ELISA Kit  11028-00-5絞股藍皂苷說明書  Stevenleaf 

Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒規格：96T/48T  130-95-0金雞納堿品牌  Quinine

載玻片細胞IP3R受體蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  485-35-8金雀花堿規格  Cytisine

Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISA試劑盒雞17羥皮質類(17-OHCS)ELISA試劑盒規格：96T/48T  94079-81-9金石蠶苷  Poliumoside

小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit  482-36-0金絲桃苷說明書  Hyperoside
552-41-0丹皮酚品牌  Paeonol   豬血管緊張素轉化酶(ACE)試劑盒 Pig Angiotensin Conveing Enzyme,ACE ELISA Kit

551-15-5甘草苷品牌  Liquiritin   豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 Pig angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit

551-08-6丁烯基苯酞品牌  n-Butylidenephthalide   豬血管活性腸肽(VIP)試劑盒 Pig Vasoactive Iestinal Peptide,VIP ELISA Kit

5508-58-7新穿心蓮內酯規格  Neoandrographolide   豬旋毛蟲IgG抗體試劑盒 Pig ichinella IgG aibody ELISA Kit

5508-58-7穿心蓮內酯  Andrographolide   豬胸腺肽β4(Thymosin β4)試劑盒 Pig Thymosin β4 ELISA Kit
犬固酮(ALD)試劑盒 Canine aldosterone,ALD ELISA Kit  63223-86-9人參皂苷Rh1說明書  Ginsenoside Rh1

英文名稱HumanInhibinAELISAKit人抑制素A(INHA)規格：96T/48T  78214-33-2人參皂苷Rh2品牌  Ginsenoside Rh2

化RNA樣品儲存液50毫升  105558-26-7人參皂苷Rh3規格  Ginsenoside Rh3

RatHexokinase,HKELISA試劑盒大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒規格：96T/48T  174721-08-5人參皂苷Rh4  Ginsenoside Rh4

小鼠脂聯素受體1(ADIPOR1)ELISA試劑盒 ，英文名： ADIPOR1 ELISA Kit  364779-15-7人參皂苷Rk3說明書  Ginsenoside Rk3
PrimaCell™小鼠肺大動脈平滑肌細胞試劑盒說明書30220-46-3巨大戟醇  Ingenol   熒光定量PCR分析20樣本

30197-14-9去氧土大黃苷  Deoxyrhapontin   熒光標記法細胞端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10

30045-16-0脫氫紫堇堿品牌  Dehydrocorydaline   英文名稱抗胰島細胞抗體規格：96T/48T

30045-16-0脫氫紫堇堿  Dehydrocorydaline   英文名稱抗胰島素自體抗體規格：96T/48T

3，6-二芥子酰基蔗糖說明書  3,6’－Disinapoyl sucrose   英文名稱核糖體、P抗體、IgG/M/A規格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。