大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Rat Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常大鼠肺大靜脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

雞源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒（定量）（不含提取）482-Amino-benzyloxypyridine21632-氨基-芐氧基吡啶

豬源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒（定量）（不含提取）48N-(4-Aminobenzoyl)-β-alanine7377/8/4對(duì)甲酰-β-丙氨酸

馬源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒（定量）（不含提取）482-(2-Aminoethyl)-methylpyrrolidine51382-(2-氨乙基)-N-甲基

驢源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒（定量）（不含提取）485-Aminofluorescein332645-氨基熒光素

鼠源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒（定量）（不含提取）484-Amino,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide5229844-氨基,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺
HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人腺來源的內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil  105889-80-3  中文名：  分子式：C28H37N5O10S2 

HumanelonginA,EloAELISA試劑盒人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (Z)-Butylidenephthalide  中文名：  分子式：C12H12O2 

Humanelecon-ansfer-flavoproteinbetapolypeptide,ETFBELISA試劑盒人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  209414-27-7  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO 

HumanElastin,ELNELISA試劑盒人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile  中文名：  分子式：C7H9ClN2O 

HumanElastaseELISA試劑盒人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,18-Octadecanediol  中文名：  分子式：C18H38O2
外消旋西他列汀  rac-Sitagliptin  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗體IgG(HRAbIgG)規(guī)格：96T/48T

西他列汀  Sitagliptin Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗體IgG(HRAbIgG)規(guī)格：96T/48T

西他列汀N-硫酸鹽  Sitagliptin N-Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatHRAbIgMELISAKit大鼠抗心肌抗體IgM(HRAbIgM)規(guī)格：96T/48T

西他列汀氨基甲酰β-D-葡萄糖苷酸  Sitagliptin Carbamoyl β-D-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatHRAbIgMELISAKit大鼠抗心肌抗體IgM(HRAbIgM)規(guī)格：96T/48T

壯觀霉素鹽酸鹽  Spectinomycin hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatIerferonαELISAKit大鼠干擾素α(IFNα)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

硫酸壯觀霉素四水化合物  Spectinomycin sulfate tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatIerferonαELISAKit大鼠干擾素α(IFNα)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

坦索羅辛  tamsulosin  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)規(guī)格：96T/48T

(S)-坦索羅辛鹽酸鹽  (S)-Tamsulosin Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)規(guī)格：96T/48T

替米沙坦-d3  Telmisartan-d3  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatInhibinAELISAKit大鼠抑制素A(INHA)規(guī)格：96T/48T

替米沙坦酰基-β-D-葡萄糖苷酸-d3  Telmisartan-d3 Acyl-β-D-glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 英文名稱RatInhibinAELISAKit大鼠抑制素A(INHA)規(guī)格：96T/48T
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)人膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit  3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphthalen-1(2H)-one  中文名：  分子式：C10H10O3  度：97.0%

人酶VB(CA5B)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit  2-Aminofluorene  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N  度：99.0%

人瘤病毒58（HPV-58）ELISA試劑盒     3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol  中文名：  分子式：C19H31NO5  度：98.0%

人瘤病毒18（HPV-18）ELISA試劑盒              3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol  中文名：  分子式：C19H31NO5 

人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   英文名稱：   soluable ansferritin receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sTFeR  Rivaroxaban  中文名：利伐沙班  分子式：C19H18ClN3O5S

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。