大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取物培養

大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取物【Rat Lung: Normal Artery Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取物是從大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取的，大鼠肺大動脈平滑肌細胞從正常大鼠肺大動脈組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

霍亂弧菌實時熒光PCR檢測試劑盒TThianaphthene955苯并噻吩

河弧菌實時熒光PCR檢測試劑盒TThiamphenicol153185甲砜霉素

擬態弧菌實時熒光PCR檢測試劑盒TThevetin B271279

艱難梭菌實時熒光PCR檢測試劑盒TThevebioside1145867

艱難梭菌tcdA基因實時熒光PCR檢測試劑盒TTetrahydrolachnophyllum lactone5677
HumanDopamineD1receptor,D1RELISA試劑盒人多巴胺D1受體(D1R)ELISA試劑盒規格：96T/48T  1,6-Dioxaspiro[4.5]decan-2-methanol  中文名：  分子式：C9H16O3 

humandopamine,DAELISA試劑盒人多巴胺(DA)ELISA試劑盒規格：96T/48T  1,4-Bis(2-benzoxazolyl)naphthalene  中文名：1,4-雙(2-苯并惡唑基)萘  分子式：C24H14N2O2 

Humandopachrometaomerase,DTELISA試劑盒人多巴色素異構酶(DT)ELISA試劑盒規格：96T/48T  11,12-Di-O-acetyltenacigenin B  857897-01-9  中文名：  分子式：C25H36O7 

HumanD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISA試劑盒人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒規格：96T/48T  11-Hydroxyjasmonic acid  中文名：  分子式：C12H18O4 

HumanDiphtheriaaibodyELISA試劑盒人白喉抗體(DiphtheriaAb)ELISA試劑盒規格：96T/48T  11α-Hydroxycanrenone  192569-17-8  中文名：  分子式：C22H28O4
妥布霉素A  Tobramycin A  質量規格：美國進口 英文名稱MouseGlp-1ElisaKit小鼠胰高糖素肽(Glp-1)規格：96T/48T

生物素基妥布霉素酰胺  Biotinyl Tobramycin Amide  質量規格：美國進口 英文名稱MouseGlycogenphosphorylaseBBELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GPBB)規格：96T/48T

妥布霉素硫酸鹽  Tobramycin sulphate  質量規格：美國進口 英文名稱MouseGlycogenphosphorylaseIIELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GPII)規格：96T/48T

氘化妥布霉素  Tobramycin Deuterated  質量規格：美國進口 英文名稱MouseGlycogenphosphorylaseMMELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GPMM)規格：96T/48T

鹽酸拓撲替康標記 d6  Topotecan Hydrochloride Labeled d6  質量規格：美國進口 英文名稱MouseGlycoprotein96ELISAKit小鼠腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)規格：96T/48T

N-去甲基拓撲替康  N-Desmethyl Topotecan  質量規格：美國進口 英文名稱Mousegp130solublefragmeELISAKIT小鼠gp130規格：96T/48T

拓撲替康羧酸鈉鹽  Topotecan Carboxylic Acid  Salt  質量規格：美國進口 英文名稱MouseHAELISAKit小鼠透明質酸(HA)規格：96T/48T

拓撲替康  Topotecan  質量規格：美國進口 英文名稱MouseHbA1cELISAKit小鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)規格：96T/48T

15-酮基氟前列醇異丙酯  15-keto Fluprostenol isopropyl ester  質量規格：美國進口 英文名稱MouseHCYELISAKit小鼠同型半胱氨(HCY)規格：96T/48T

曲唑酮鹽酸鹽-d6  Trazodone-d6 Hydrochloride  質量規格：美國進口 英文名稱Mousehemeoxygenase-1ELISAKit小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)規格：96T/48T
大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取物培養人視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISAKit                 Thiamphenicol  15318-45-3  中文名：甲砜霉素  分子式：C12H15Cl2NO5S 

人生長激素受體(GHR)酶聯吸附測定試劑盒   Human GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit                  3,5-Di-O-caffeoylquinic acid  中文名：異綠原酸A  分子式：C25H24O12 

人三0酸鳥苷環水解酶1   英文名稱：   Human Guanosine 5′-iphosphate Cyclohydrolase 1   規格：   48T/96T   英文縮寫：   GCH1  3-O-Acetylandrostenone hydrazone  中文名：3-O-乙酰基雄酮腙  分子式：C21H32N2O2 

人乳酸脫氫酶   英文名稱：   Human Lactate Dehydrogenase   規格：   48T/96T   英文縮寫：   LDH  3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名：  分子式：C6H4Cl2OS 

人溶菌酶   英文名稱：   lysozyme   規格：   48T/96T   英文縮寫：   LZM/LYS  3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan  中文名：  分子式：C17H16ClIO2  度：98.0%

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。