人肺癌組織源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

人肺癌組織源細(xì)胞【Human Cancer: Lung Cancer Tissues CellsDerivatives】

人肺癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代肺癌組織源細(xì)胞提取的，人原代肺癌組織源細(xì)胞從人肺癌組織制備。人肺癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

三聚胺Elisa檢測(cè)試劑盒96Bathophenanthroline16621紅菲繞啉

蘇丹紅Elisa檢測(cè)試劑盒964'-Amino',5'-dichloroacetophenone3714883',5'-二氯'-乙酮

β-激動(dòng)劑Elisa檢測(cè)試劑盒962-Amino-chloropurine312-氨基-氯嘌呤

萊克多巴胺Elisa檢測(cè)試劑盒96Acetophenone tosylhydrazone45451苯乙酮對(duì)甲苯磺酰基腙

皮質(zhì)類固醇Elisa檢測(cè)試劑盒962-Amino-chlorobenzothiazole1995272-氨基-氯苯并噻唑
mouse Activin A   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   *     Otophylloside F  250217-73-3  中文名：青陽(yáng)參苷F  分子式：C48H76O16 

MiniELGelExactionKit   100T  Androst-5-en-3-ol-7,17-dione acetate  1449-61-2  中文名：7-酮基去氫表雄酮醋酸酯  分子式：C21H28O4 

MiniEleDNAKit   100T                 Androst-2-en-17-one  中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮  分子式：C19H28O 

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒   Rapid exaction kit for M13 phage single chain genomic DNA  Panaxyne  中文名：  分子式：C14H20O2 

L-異亮酸   10g  Vildagliptin  274901-16-5  中文名：維達(dá)列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
鹽酸左西替利嗪  Levoceitrizine HCl  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

鹽酸西替利嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cetirizine Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit 96T/48T

鹽酸雷莫司瓊（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ramosetron hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒 ，英文名： GIP ELISA Kit

*度酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Etodolac  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GL2)ELISA試劑盒 ，英文名： GL2 ELISA Kit

標(biāo)準(zhǔn)品）  Amfebutamone Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GL4)ELISA試劑盒 ，英文名： GL4 ELISA Kit

鹽酸羅格列酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  rosiglitazone hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 小鼠遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

苯馬隆（標(biāo)準(zhǔn)品）  BENZBROMARONE  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠前白蛋白(PA)ELISA試劑盒 ，英文名： PA ELISA Kit

鹽酸布替萘芬（標(biāo)準(zhǔn)品）  Butenafine HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 小鼠前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA試劑盒 ，英文名： PCSK9 ELISA Kit

鹽酸托烷司瓊（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tropisetron hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠前動(dòng)力蛋白2(PK2)ELISA試劑盒 ，英文名： PK2 ELISA Kit

鹽酸托烷司瓊  Tropisetron hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠前動(dòng)力蛋白受體1(PKR1)ELISA試劑盒 ，英文名： PKR1 ELISA Kit
人肺癌組織源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)Withaperuvin C  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   MMP-1

Otophylloside O  中文名：  分子式：C56H84O20  度：96.5%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   MMP-2

Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit  

Otophylloside F  中文名：青陽(yáng)參苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  兔(NO)ELISAKit  

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：98.0%  兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。