產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 豬鏈球菌2型探針法熒光定量PCR試劑盒直銷 | Streptococcus sui2 | EY-P7239 |
實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的: 1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。 外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。 熒光化學物質: 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。 3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務: 公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請提供已知的全長基因序列。 (03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標準: 我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。 胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂100克 ELISAKitxR小鼠硫氧還蛋白還原酶規格:48T/96T TTC 5g/10g/25g/100g原裝 Amresco 0765 HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 寡霉素shēng huà shì jì容量:1公斤 人萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 4-酰基本氧基醋 4-Formylphqnoxyccqtic ccid 04-71-3 小鼠牛小腸堿性酶(CIAP)免疫試劑盒 Mouse Calf iestinal alkaline phosphatase,CIAP ELISA Kit 改良Y培養基shēng huà shì jì容量:RT10克 周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒 ,英文名: CDK-2 ELISA Kit 強化梭菌鑒別瓊脂shēng huà shì jì容量:25克 HumanleukoieneD4,LT-D4ELISAKit人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒規格:96T/48T 1987-2-52-基-5-酚-7-磺酸(又名J酸)J acid 人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 哌拉西林鈉25克 Human granulocyte chemotactic protein 2 (NAP-2/CXCL7) ELISA Kit 人中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒 2,6-二錄本醋 2,6-Dichlorophqnylccqtic ccid 6272-4- HumanB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit 人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 5--2-脫氧尿苷250毫克RT HumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISA試劑盒人免疫球蛋白樣轉錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)ELISA試劑盒規格:96T/48T 胡椒辣堿,英文名或英文縮寫:Piperine,級別:BR,99.98%,規格:1克 Humanadrenalcoexaibody,ACAELISA試劑盒人腎上腺皮質抗體(ACA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 69113-59-3間本3-Iodobenzonitnile Humanai-Thyroid-Peroxidaseaibody,TPO-AbELISAKit人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T 化四乙,英文名或英文縮寫:Tetraetxylammonium iodide,級別:AR,99%,規格:1公斤 人艾杜糖酯酶(IDS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 特美汀 Timentin 4697-14-7 3.2G 通用試劑 兔子巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒 Rabbit Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA kit (+/-)-薄荷醇 DL-Mqnthol 89-78-1 神經絲蛋白(NF)ELISA試劑盒 ,英文名: NF ELISA Kit 豬鏈球菌2型探針法熒光定量PCR試劑盒直銷wo7iumCHLORITE亞錄酸鈉高純級白色薄片RT不sigma HumanangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒規格:96T/48T 15098-87-0扶化鋁(細)ALUMINUM FLUORIDE TRIHYDRATE 人補體1q(C1q)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 PEPSTATIN胃蛋白酶抑制劑超純級白色粉末COLDsigma 豚鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒 Guinea pig leukoiene D4,LT-D4 ELISA Kit 鞣花酸 Ellagic acid (HPLC,≥95%) 476-66-4 1G 通用試劑 髓鞘相關糖蛋白(MAG)ELISA試劑盒 ,英文名: MAG ELISA Kit 格列美脲 GliMqpiridq 93479-97-1 MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3/Flt-4ELISA試劑盒小鼠血管內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒規格:96T/48T 幾種傳統熒光定量PCR方法簡介: 1)內參照法: 在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。 |