人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Glioma Tissues Cells Derivatives】

人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞提取物是從人原代膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞提取的，人原代膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞從人膠質(zhì)瘤組織制備。人膠質(zhì)瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

沙丁胺醇?xì)埩魴z測試紙條Benzoin methyl ether35242安息香甲基醚

萊克多巴胺殘留檢測試紙條Benzoin isopropyl ether66528安息香

克侖特羅殘留檢測試紙條Benzoin ethyl ether5749安息香

Anti E-tag Beads磁珠Benzoguanamine916苯代三聚胺

凝膠純化回收試劑盒0次/盒Benzofuroxan46苯并呋咱
Mumeose K  中文名：  分子式：C25H32O15  度：93.0%  兔子腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒  

Neochlorogenic acid methyl ester  中文名：新綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：97.5%  兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒  

Ethyl 3,5-di-O-caffeoylquinate  中文名：3,5-二咖啡酰奎寧酸乙酯  分子式：C27H28O12  度：98.0%  兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒  

3-O-(6'-O-Galloyl)-β-D-glucopyranosylmaltol  中文名：  分子式：C19H20O12  度：97.5%  兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒            

Falcarindiol  中文名：  分子式：C17H24O2  度：97.0%  兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISAKit
楊梅醇 HPLC≥98% 5mg Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

楊梅酮 HPLC≥98% 5mg RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

洋椿苦素 HPLC≥98% 5mg RabbitVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKit兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

洋紫蘇醇B HPLC≥98% 5mg RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

野甘草屬醇 HPLC≥98% 5mg RabbitvonWillebrandFactor,VWFELISAKit兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

野黑櫻苷 HPLC≥98% 20mg Rabbitα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

野黑櫻苷 HPLC≥98% 5mg Rabbitβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

葉含乙酰癭花香茶菜素 A HPLC≥98% 5mg Rac1鳥苷酸酶活性分析試劑盒6

葉含乙酰癭花香茶菜素 B HPLC≥98% 5mg Rac2鳥苷酸酶活性分析試劑盒6

葉下珠脂素 HPLC≥98% 5mg RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞提取物培養(yǎng)Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  酸漿屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒  

Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄內(nèi)酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄內(nèi)酯; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒  

Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  細(xì)胞毒活性; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒  

Wallicoside  88797-59-5  中文名：斷節(jié)參苷  分子式：C61H98O26  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒           

Vildagliptin  274901-16-5  中文名：維達(dá)列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。