人腎系膜組織提取物培養(yǎng)

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人腎系膜組織提取物【Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives】

人腎系膜組織主要功能有：(1)組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分。(2)在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受損后影響系膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞，進(jìn)而影響腎臟病變。公司科技提供來自新鮮或冷凍人腎系膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

Tray Cleaner（水盤抑菌劑）Axitinib31945阿西替尼

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Room Cleaner4 mLAurantio-obtusin679795橙黃決明素

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Ergosterol glucoside  中文名：麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6  度：97.5%  兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒  

Phyperunolide E  中文名：  分子式：C28H40O9  度：98.0%  兔血清(NO)ELISA試劑盒  

Withanolide C  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒           

Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1   英文名稱：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOX-1

4β-Hydroxywithanolide E  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  兔脂氧合酶同工酶   英文名稱：   Rabbit Lipoxygenase Isozymes   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOXI
瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸  Rosuvastatin  質(zhì)量規(guī)格：>97%,游離酸 大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)試劑盒 Rat Chorionic Gonadoophin β,β-CG ELISA Kit

蘇丹I/溶劑黃14  Sudan I/Solvent Yellow 14  質(zhì)量規(guī)格：BS生物染色級(jí) 大鼠溶質(zhì)載體家族2(易化葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白),成員2(SLC2A2)試劑盒 Rat Sole carrier family 2,facilitated glucose anspoer member 2,SLC2A2 ELISA kit

蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7  Sudan II /Solvent Orange 7  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶(CACT)試劑盒 Rat carnitine-acylcarnitine anslocase,CACT ELISA Kit

蘇丹Ⅲ/蘇III/溶劑紅23  Sudan3  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉堿試劑盒 Rat Total Carnitine ELISA Kit

蘇丹Ⅳ/蘇4/溶劑紅24  Sudan IV/Solvent Red 24  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-Ⅰ(CPT1)試劑盒 Rat Carnitine palmitoylansferase I,CPT1 ELISA kit

油紅O/溶劑紅27/蘇5B  Oil red O/Solvent Red 27   質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA檢測(cè)試劑盒RatLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T

蘇G/溶劑紅1/油紅113  Sudan red G/Solvent Red 1  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)試劑盒 Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit

/溶劑黑3  Sudan Black B /Solvent Black 3  質(zhì)量規(guī)格：BS(生物染色) 大鼠軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)試劑盒 Rat cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA Kit

蘇B  Sudan Red B/Solvent Red 25  質(zhì)量規(guī)格：AR 大鼠*腺原氨酸(T3)抗體試劑盒 Rat i-iodothyronine(T3)aibody ELISA kit

蘇7B/溶劑紅19/脂肪紅7B  Sudan Red 7B/Solvent Red 19  質(zhì)量規(guī)格：BS 大鼠*狀腺原氨酸(T3)ELISA檢測(cè)試劑盒Rati-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T
人腎系膜組織提取物培養(yǎng)兔內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISAkit     4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒、兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Benzyloxyindole  中文名：5-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒     5-Benzyl-1H-tetrazole  中文名：5-芐基-1H-四唑  分子式：C8H8N4O  度：98.0%

兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISAKit                 6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5 

兔內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  147619-40-7  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2

注意事項(xiàng)；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。