大鼠肺大靜脈平滑肌細胞說明書

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大鼠肺大靜脈平滑肌細胞【Rat Lung: Normal Vein Smooth Muscle Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠?源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基1公斤  MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP-2ELISA試劑盒小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(Tris飽和酚)  ELISAKitIgA兔子免疫球蛋白A規(guī)格：48T/96T

聚乙二醇20000shēng huà shì jì容量：250毫克  ChickenIerferonγ,IFN-γELISAKit雞γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

隊典本晴 4-Iodobqnzonitnilq 3028-39-7  人庚肝抗體(HGVAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

甲殼胺shēng huà shì jì容量：500克  小鼠白介素1受體相關(guān)激酶1(IRAK1)免疫試劑盒 Mouse Ierleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1 ELISA kit
碳酸鎳，英文名或英文縮寫：Nickel(II) caonate basic tetrahydrate，級別：AR，99%，規(guī)格：5克  神經(jīng)型合成酶(nNOS)ELISA試劑盒 ，英文名： nNOS ELISA Kit

13292-87-0二甲硫醚絡(luò)合物Borane-metxyl sulfide coMplex AcroSeal  PorcineHydrocoisone,HYDELISA試劑盒豬(HYD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-酸鈉均聚物，英文名或英文縮寫：PAAS，級別：IPC，98%，規(guī)格：5克  HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISA試劑盒人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

訶子鞣酸 Chebulagic acid (HPLC,≥98%) 23094-71-5 5MG 標(biāo)準(zhǔn)品  Humanai-Sa-aibodyELISAKit人抗Sa抗體(ai-Sa-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

DL-蘇安醋;DL-α-安基-β-羌基丁醋;DL-羌基丁安醋;DL-異赤絲藻安基醋 DL-Thrqoninq;DL-2-cMino-3-xy7noxybutcnoic ccid 80-68-  人白介素13(IL-13)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
葡萄糖酸5克2～8℃  Humanpulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISA試劑盒人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4163-60-4β-D-半乳糖五乙酸酯beta-D-Galactose pentaacetate  ELISAKitHBeAb小鼠乙型肝炎e抗體規(guī)格：48T/96T

卡拉膠類型III，英文名或英文縮寫：K-Carrageenan Karra Type，級別：AR，98%，規(guī)格：100克  humancolicinELISAKit人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硫化鉀 Potassium Sulfide,40% 1312-73-8 250G 通用試劑  人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

N-(γ-L-谷安酰)-1-安(+4°C) L-GLUTcMIC cCID GcMMc-(BqTc-NcPHTHYLcMIDq) 1422-44-1  小鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)免疫試劑盒 Mouse platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit
大鼠肺大靜脈平滑肌細胞說明書鄰啰啉鹽酸鹽shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100ku  兔白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

PyroninB 1g/5g/10g原裝 Amresco 0724  Human insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 人胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒

螯合瓊脂糖凝膠FF500毫克  HumanlisteriolysinELISAKit 人單核細胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

5-錄1吩-2-磺酰錄 5-Chlorothiophqnq-2-sulfonyl chloridq 766-74-7  Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISA試劑盒人糖1脂酰肌醇(GPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L--谷二肽25克RT，避光  組織蛋白巰基/結(jié)合巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。