PrimaCell™小鼠結腸平滑肌細胞試劑盒培養

PrimaCell™小鼠結腸平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

犬維生素A(VA)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T  487-41-2連翹苷  Phillyrin

犬透明質酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit  79916-77-1連翹脂苷A說明書  Forsythoside A

英文名稱HumaumornecrosisfactorβELISAKIT人腫瘤壞死因子β(TNFβ)規格：96T/48T  81525-13-5連翹脂苷B品牌  Forsythoside B

超氧化物歧化酶(SOD)細胞裂解樣品制備試劑盒50  2586-96-1蓮心堿規格  Liensinine

ratgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISA試劑盒大鼠促生長激素釋放激素(GRH)ELISA試劑盒規格：96T/48T  5088-90-4蓮心堿高氯酸鹽  Liensinine Perchlorate
530-57-4丁香酸  Syringic acid   豬瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒PorcineLeptin,LEPELISAKit 96T/48T

5302-45-4三七素品牌  dencichine  豬生長抑素(SS)ELISA檢測試劑盒PorcineSomatostatin,SSELISAKit 96T/48T

529-59-9染料木苷規格  Genistin  豬生長激素(GH)ELISA檢測試劑盒Porcinegrowthhormone,GHELISAKit 96T/48T

529-53-3野黃芩素品牌  Scutellarein  豬皮質酮/腎上腺酮(CO)ELISA檢測試劑盒PorcineCoicosterone,COELISAKit 96T/48T

529-53-3野黃芩素規格  Scutellarein   豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測試劑盒PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 96T/48T
犬球蛋白G(IgG)試劑盒 Dog Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit  15291-75-5銀杏內酯A規格  Ginkgolide A

英文名稱HumanOxLDLELISAKit人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)規格：96T/48T  15291-77-7銀杏內酯B  Ginkgolide B

化微粒體1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測試劑盒20  15291-76-6銀杏內酯C說明書  Ginkgolide C

RatImmunoglobulinM,IgMELISA試劑盒大鼠球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規格：96T/48T  107438-79-9銀杏內酯J品牌  Ginkgolide J

小鼠粘蛋白4(MUC4)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC4 ELISA Kit  481-46-9銀杏素規格  Ginkgetin
PrimaCell™小鼠結腸平滑肌細胞試劑盒培養340963-86-2遼東楤木皂苷V  Araloside V   載玻片細胞CASPASE-7蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

33889-69-9水飛薊汀  Silicristin   載玻片細胞CASPASE-5蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

33889-68-8防己諾林堿規格  Fangchinoline   載玻片細胞CASPASE-3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

33783-82-3HederacolchisideE說明書  Hederacolchiside E   載玻片細胞CASPASE-2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

33570-04-6白果內酯  Bilobalide   載玻片細胞CASPASE-10蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20