產(chǎn)品名稱(chēng) | PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書(shū) | 英文名稱(chēng) | | 貨號(hào) | EYX99681 |
PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細(xì)胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明; 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點(diǎn); 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿(mǎn)37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 載玻片細(xì)胞組蛋白NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 13241-33-3新橙皮苷說(shuō)明書(shū) Neohesperidin Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISA試劑盒小鼠小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌 Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside 小鼠載脂蛋白A4(APOA4)ELISA試劑盒 ,英文名: APOA4 ELISA Kit 三七總皂苷規(guī)格 Panax notoginsenosides 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit 96T/48T 133-05-1細(xì)辛脂素 Asarinin 犬甲狀腺素(T4)試劑盒 Canine thyroxine,T4 ELISA Kit 126-17-0澳洲茄胺說(shuō)明書(shū) Solasodine 15291-75-5銀杏內(nèi)酯A規(guī)格 Ginkgolide A 英文名稱(chēng)RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)規(guī)格:96T/48T 152743-19-6石吊蘭素品牌 Lysionotin 英文名稱(chēng)RatHIF-1αELISAKit大鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)規(guī)格:96T/48T 152743-19-6石吊蘭甲素品牌 Lysionotin 英文名稱(chēng)Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規(guī)格:96T/48T 14937-32-71,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖品牌 1,2,3,4,6-pentagalloylglucose 英文名稱(chēng)Rathemeoxygenase-2ELISAKit大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)規(guī)格:96T/48T 14937-32-71,2,3,4,6-O-五沒(méi)食子酰葡萄糖品牌 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose 英文名稱(chēng)Rathemeoxygenase-1ELISAKit大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)規(guī)格:96T/48T 英文名稱(chēng)HumanangiotensinogenELISAKit人血管緊張素原(aGT)規(guī)格:96T/48T 69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉品牌 Tanshinone IIA-sulfonic 化線(xiàn)粒體損傷/氧化(NAO)熒光測(cè)定試劑盒20/200 53452-16-7王不留行黃酮苷規(guī)格 Vaccarin RatIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 94987-08-3絞股藍(lán)皂苷 Stevenleaf 小鼠原鈣黏素15(PCDH15)ELISA試劑盒 ,英文名: PCDH15 ELISA Kit 6024-85-7延胡索乙素說(shuō)明書(shū) Tetrahydropalmatine 猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T 6080-33-7鹽酸青藤堿品牌 Sinomenine PrimaCell™大鼠腦膜成纖維細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書(shū)81-54-9羥基茜草素品牌 Purpurin 組織CDK2/CYCLINA激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20 81525-13-5連翹脂苷B品牌 Forsythoside B 組織CASEINKINASE1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20 81-27-6番瀉苷A品牌 Sennoside A 組織CASEINKINASE1δ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20 80952-72-3(R型)人參皂苷Rg2品牌 20(R)Ginsenoside Rg2 組織BTK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20 80952-72-3(R型)人參皂苷Rg2 20(R)Ginsenoside Rg2 組織B-RAF激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20 運(yùn)輸和保存; 視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。 1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。 |