藍(lán)舌病病毒（BTV）核酸檢測試劑盒方法

組成及試劑配制:
1、藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

需要自備的器材：
1．藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

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尿囊酸酶(ALLC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

尾加壓素2(UST2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

尾加壓素2受體(UTS2R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

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尾型同源框轉(zhuǎn)錄因子2(CDX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

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藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法重組人 Galectin-7 / LGALS7 蛋白 (His 標(biāo)簽)LGALS7 ProteinHuman

重組人 IL-31 / IL31 蛋白 (His 標(biāo)簽)IL31 ProteinHuman

重組人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白CTF1 ProteinHuman

重組人 IL5 / Interleukin 5 蛋白IL5 ProteinHuman

重組人 AMTN / Amelotin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)AMTN ProteinHuman

重組人 EDNRB / Endothelin B Receptor 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)EDNRB ProteinHuman

重組人 DHRS9 蛋白 (His 標(biāo)簽)DHRS9 ProteinHuman

重組人 PRNP / Prion 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)PRNP ProteinHuman

重組人 IL-17F / IL17F 蛋白IL17F ProteinHuman

重組人 CCL28 蛋白 (His 標(biāo)簽)CCL28 ProteinHuman

重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)CLEC7A ProteinHuman
反應(yīng)五要素：
藍(lán)舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。