綿羊痘病毒（SPPV）核酸檢測試劑盒說明書

組成及試劑配制:
1、綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

需要自備的器材：
1．綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

以下是綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書的訂購信息：

尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

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尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙酸受體1(NIACR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙堿型膽堿受體α1(CHRNα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙堿型膽堿受體α1(CHRNα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙堿型膽堿受體α2(CHRNα2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T

煙堿型膽堿受體α3(CHRNα3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　  *  規(guī)格：　48T/96T
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書重組人 TNFRSF11A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)TNFRSF11A ProteinHuman

重組人 MCEMP1 / C19orf59 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)MCEMP1 ProteinHuman

重組人 ATP6V1F 蛋白 (GST 標(biāo)簽)ATP6V1F ProteinHuman

重組人 Phosphoglycerate Kinase 2 / PGK2 蛋白 (His 標(biāo)簽)PGK2 ProteinHuman

重組人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 (His 標(biāo)簽)ARF1 ProteinHuman

重組人 TRIP10 / Cip4 蛋白 (His 標(biāo)簽)TRIP10 ProteinHuman

重組人 LPAL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)LPAL2 ProteinHuman

重組人 NAGA / Alpha-N-acetylgalactosaminidase 蛋白 (His 標(biāo)簽)NAGA ProteinHuman

重組人 CALCA / CGRP 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)CALCA ProteinHuman

重組人 K-Ras / K-Ras (12 Cys) 蛋白 (His 標(biāo)簽)KRAS ProteinHuman

重組人 K-Ras / K-Ras (12 Asp) 蛋白 (His 標(biāo)簽)KRAS ProteinHuman
反應(yīng)五要素：
綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒說明書參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。