人脂肪細胞提取物說明書

人脂肪細胞提取物【Human Fat: Normal Adipose Cells Derivatives】

人脂肪細胞提取物是從人原代脂肪細胞提取的，人原代脂肪細胞從正常人脂肪組織制備。正常人脂肪組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

犬腺病毒1型實時熒光PCR檢測試劑盒Oxytetracycline hydrochloride586鹽酸土霉素

犬腺病毒2型實時熒光PCR檢測試劑盒Oxymetholone4347康復龍

犬呼腸孤病毒RT-PCR檢測試劑盒/Oxiracetam626132奧拉西坦

犬副流感病毒RT-PCR檢測試劑盒/Oxaprozin212568奧沙普秦

犬副流感病毒實時熒光RT-PCR檢測試劑盒Oxandrolone539氧甲氫龍
Methyl 4'-methylbiphenyl-2-carboxylate  114772-34-8  中文名：  分子式：C15H14O2    人轉錄因子   英文名稱：   Human Engrailed-2   規格：   48T/96T   英文縮寫：   EN-2

4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  152628-03-0  中文名：  分子式：C12H14N2O2    E選擇素   英文名稱：   Human E selectin   規格：   48T/96T   英文縮寫：   ES

Androstenediol  521-17-5  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2    上皮鈣粘蛋白   英文名稱：   Human E.cadherin   規格：   48T/96T   

Testosterone benzoate  2088-71-3  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3    內皮素受體A   英文名稱：   Human Endothelin Receptor A   規格：   48T/96T   英文縮寫：   EA

Norandrostenedione  734-32-7  中文名：19-去甲-4-雄烯二酮  分子式：C18H24O2    人轉錄激活因子4(ATF4)酶聯吸附測定試劑盒   Human ATF4 (Activating anscription Factor 4) ELISA Kit
鹽酸哌唑嗪  Prazosin HCl  質量規格：>99%,BR 大鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒 Rat Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA KIT

醋酸潑尼松龍  Prednisolone acetate  質量規格：>97%,USP,BR 大鼠壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)試劑盒 Rat tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A,TNFRSF11A/RANK ELISA kit

醋酸潑尼松  Prednisone Acetate  質量規格：>98%,BR 大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體(AIL)試劑盒 Rat tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,AIL ELISA Kit

醋酸潑尼松（標準品）  Prednisone Acetate  質量規格：HPLC>98%,標準品 大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體受體1(AIL-R1)試劑盒 Rat AIL-R1 ELISA Kit

普瑞巴林  Pregabalin  質量規格：>99%,S構型 大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體受體3(AIL-R3)試劑盒 Rat AIL R3 ELISA Kit

鹽酸丙卡巴肼/鹽酸甲基芐肼  Procarbazine HCl  質量規格：>98.5%,USP,BR,可用于細胞培養  大鼠壞死因子相關凋亡誘導配體受體4(AIL-R4)試劑盒 Rat AIL-R4 ELISA Kit

鹽酸丙卡巴肼(標準品)  Procarbazine HCl  質量規格：HPLC>98%,標準品 大鼠壞死因子誘導蛋白6(TSG-6)試劑盒 Rat tumor necrosis factor-inducible gene 6 protein,TSG-6 elisa kit

鹽酸丙卡特羅  Procaterol HCl  質量規格：>98.5%,CP2005,半水合物 大鼠環0酸腺苷(cAMP)ELISA檢測試劑盒Ratcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit 96T/48T

丙泊酚  Propofol  質量規格：>98.0%,熔點18 大鼠環孢素A(CsA)ELISA檢測試劑盒RatCyclosporineA,CsAELISAKit 96T/48T

鹽酸雷洛昔芬  Raloxifene HCl  質量規格：>98.5%,BR 大鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA檢測試劑盒RatLeinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISAKit 96T/48T
人脂肪細胞提取物說明書α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2    血清鐵檢測   Copper blue protein (CP) detection

α-Spinasterol  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O    總鐵結合力（TIBC）檢測   5 'nucleotide enzyme (5' ) detection

α-Lipoic acid  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2    銅蘭蛋白（CP）檢測   Glamate detection              

α-Lapachone  中文名：  分子式：C15H14O3    游離脂肪酸含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

α-D-Glucose  中文名：α-D-葡萄糖  分子式：C6H12O6    脂肪酶（LPS）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣