人小腸平滑肌細胞提取物培養(yǎng)

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人小腸平滑肌細胞提取物【Human Intestinal: Normal Intestinal Smooth Muscle Cell Derivatives】

人小腸平滑肌細胞提取物是從人原代小腸平滑肌細胞提取的，人原代小腸平滑肌細胞從正常人小腸組織制備。正常人小腸組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

豬圓環(huán)病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*2Ethyl 3-(4-(methylamino)-nitro-N-(pyridin-yl)benzamido)propanoate4296591

豬傳染性胃腸炎病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*2Ethyl 3-(3-amino-(methylamino)-N-(pyridin-yl)benzamido)propanoate2123226

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豬偽狂犬GE病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*2Ethyl 2-(3-formyl-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617981
Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2    大鼠去甲上腺素(NA)ELISAKit  

Pioglitazone hydrochloride  中文名：鹽酸吡格列酮  分子式：C19H21ClN2O3S    大鼠前列腺素F(PGF)ELISAKit              

Pilosol A  中文名：  分子式：C13H12O    中文名稱   方法   規(guī)格

Pidotimod  中文名：匹多莫德  分子式：C9H12N2O4S    大鼠過敏/補體片斷4a(C4a)ELISAKit  

Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7    大鼠過敏/補體片斷4a(C4a)ELISAKit
紫草酸 HPLC≥98% 20mg Mouseangiotensinogen,aGTELISA試劑盒小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫丁香酚苷（刺五加苷B） HPLC≥98% 20mg MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISA試劑盒小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫花前胡苷 HPLC≥98% 20mg MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫堇塊莖堿 HPLC≥98% 10mg MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA試劑盒小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫菫定酚 HPLC≥98% 10mg MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA試劑盒小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫蓳靈 HPLC≥98% 20mg MouseannexinⅤ,ANX-ⅤELISA試劑盒小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫莖女貞苷A HPLC≥98% 10mg Mouseansferrieceptor,TFRELISA試劑盒小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫莖女貞苷B HPLC≥98% 10mg Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISA試劑盒小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫莖女貞苷C HPLC≥98% 10mg MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISA試劑盒小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫莖女貞苷D HPLC≥98% 10mg Mouseansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISA試劑盒小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人小腸平滑肌細胞提取物培養(yǎng)Senkyunolide H  94596-27-7  中文名：  分子式：C12H16O4  度：96.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒  

Senkyunolide G  94530-85-5  中文名：洋川芎內(nèi)酯G  分子式：C12H16O3  度：%  關(guān)鍵詞：    小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒           

Senkyunolide E  94530-83-3  中文名：  分子式：C12H12O3  度：%  關(guān)鍵詞：  川芎; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠血小板相關(guān)抗體IgG   英文名稱：   platelet-associated aibody IgG   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PAIgG

Senkyunolide C  91652-78-7  中文名：洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H12O3  度：96.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠增殖細胞核抗原   英文名稱：   Proliferating Cell Nuclear Aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PCNA

Schleicheol 2  256445-68-8  中文名：  分子式：C30H52O2  度：%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠血小板生長因子   英文名稱：   plateler-derived growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PDGF

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。