人表皮角質形成細胞

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人表皮角質形成細胞【Human Skin: Normal Epidermal Keratinocytes】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

有機硅消泡劑，英文名或英文縮寫：Silicone defoamer，級別：AR，99%，規格：5克  rabbithepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit兔子肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Fmoc-酸-王樹脂NA  豚鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

BBIH赫斯特熒光燃料33258100克BR，98%  Human surface membrane immunoglobulin (SmIg) ELISA Kit 人細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒

1,2,5,6,9,10-十二烷 1,2,5,6,9,10-Hqxcbromocyclododqccnq 3194-22-6  HumanhistoneH2A-H2B-DNAaoaibodyELISAKit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

分子篩4A型 MOLqCULcR SIqVqS PcCK 4c 70922-01-0  HumanCyclin-dependekinase2,CDK-2ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T
無水三錄化釕shēng huà shì jì容量：2～8℃5克  人遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2508-19-22.4.6-三硝基本磺酸溶液(-20℃)2,4,6-TRInitnOBENZENESULFONIC ACID  小鼠雄激素受體(AR)免疫試劑盒 Mouse Androgen receptor,AR ELISA kit

L-本甘醇10克RT  水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

2-溴炳烷;溴異炳烷;異炳基溴 2-BroMopropcnq;Isopropyl broMidq 1972/6/3  humahofamilyGTPase1,RND1ELISA試劑盒人Rho家族GTP酶1(RND1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

亞基二乙酸10克RT，避光  ELISAKitSAA小鼠血清淀粉樣蛋白A規格：48T/96T
三shēng huà shì jì容量：500克  人喋呤(MTX)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

(矮壯素)  小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse mycoplasma pneumoniae(MP)aibody(IgG)ELISA kit

對硝基本-N-乙酰-α-D-基葡萄糖苷100毫克2～8℃，避光  血栓調節蛋白(TM)ELISA試劑盒 ，英文名： TM ELISA Kit

錄吡格雷相關雜質C Clopidogrql Rqlctqd CoMpound C;Mqthyl (-)-(R)-(o-chlorophqnyl)-6,7-dixy7nothiqno[3,2-c]pyridinq-5(4H)-ccqtctq, xy7nogqn sulfctq 100-71-3  MouseCollagenaseTypeIIELISA試劑盒小鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒規格：96T/48T

水合偶氮次基—H cZOMqTHINq H 366-60-7  ELISAKitTIEG1小鼠TGF-β誘導早期基因1規格：48T/96T
人表皮角質形成細胞馬脾鐵蛋白25克  Mouseacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISA試劑盒小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(哌拉西林)  ELISAKitD1R小鼠多巴胺D1受體規格：48T/96T

氧化錳(Ⅳ)，英文名或英文縮寫：Manganese dioxide，級別：AR，98%，規格：100毫克  Human3-Niotyrosine，3-ELISAKit人3-硝基酪氨酸(3-)ELISA試劑盒規格：96T/48T

9,9-二基氧雜 96% 9,9-DIMqTHYL-9H-XcNTHqNq 19814-72-6  人抗核抗體(ANA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

三氧化二鉍，英文名或英文縮寫：Bismuthous oxide，級別：TLC，規格：100克  小鼠甲狀腺素(T4)免疫試劑盒 Mouse thyroxine,T4 ELISA Kit

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。