小鼠結腸平滑肌細胞提取物培養(yǎng)

小鼠結腸平滑肌細胞提取物【Mouse Intestine: Normal Colonic Smooth Muscle Cell Derivatives】

小鼠結腸平滑肌細胞提取物是從小鼠結腸平滑肌細胞提取的，小鼠結腸平滑肌細胞從正常小鼠結腸組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

通用型單重熒光PCR 檢測試劑盒48Minocycline hydrochloride136148

高致病性H5N1病毒雙重熒光PCR 檢測試劑盒48Nisoldipine636752尼索地平

H5N2病毒雙重熒光PCR 檢測試劑盒48Benzyl 2-aminoacetate p-sulfonate17386

H5病毒單重熒光PCR檢測試劑盒482-Benzylacrylic acid56699

H7病毒單重熒光PCR檢測試劑盒48Racecadotril8113消旋卡多曲
Methasterone  3381-88-2  中文名：甲基屈他雄酮  分子式：C21H34O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒  

Metamizole   68-89-3  中文名：安乃近  分子式：C13H16N3NaO4S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠脫氫表雄酯(DHEA-S)ELISA試劑盒  

Mesterolone  1424-00-6  中文名：甲氫睪酮  分子式：C20H32O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠脫氫表雄S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒           

Mestanolone  521-11-9  中文名：美雄諾龍  分子式：C20H32O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠脫氧酚elisa試劑盒   小鼠脫氧酚試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠脫氧酚試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠脫氧酚試劑盒、小鼠脫氧酚eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Mequindox  13297-17-1  中文名：乙酰甲喹  分子式：C11H10N2O3  度：98.0%      小鼠粘蛋白elisa試劑盒   小鼠粘蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠粘蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠粘蛋白試劑盒、小鼠粘蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。
鹽酸鑭六水(>99%,BR)  Lanthanum (III) chloride, hexahydrate  質量規(guī)格：>99%,BR 動物組織肌質網(wǎng)橫小管(TTube)分離試劑盒10

三氧化鉬(>98%,BR)  Molybdic oxide  質量規(guī)格：>98%,BR 動物組織肌質網(wǎng)三聯(lián)體(IAD)分離試劑盒10

木瓜蛋白酶懸浮液  Papain 2x crystallized from papaya Latex  質量規(guī)格：比活度：>20 U/mg，BC 動物組織基因組DNA分離試劑盒50

苯磺酸鈉(>98%，BR)   benzenesulfonate  質量規(guī)格：>98%，BR 動物組織鎂ATP酶(Mg++-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

過氧化物歧化酶(SOD)  Superoxide dismutase from Bovine Erythrocytes(SOD)  質量規(guī)格：比活度：>5000 U/mg,BC 動物組織膜性囊泡(RSOV和IOV)制備試劑盒20

三十烷醇(>98%,植物激素級)  Triacontanol  質量規(guī)格：>98%,植物激素級 動物組織內質網(wǎng)粗提分離試劑盒10

4-羥基(>98.0%，BR)  4-Hydroxybenzaldehyde  質量規(guī)格：>98.0%，BR 動物組織羥脯氨酸(hydroxyproline)比色法定量檢測試劑盒20

低內牛血清白蛋白  Albumin, from bovine pH 7.0 Low endotoxin  質量規(guī)格：>97%,Biotech Grade 動物組織羥脯氨酸(HYP)比色法定量檢測試劑盒20

梭菌蛋白酶  Clostripain  質量規(guī)格：酶活：>50U/mg,進分 動物組織氫/ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

2'-脫氧鳥苷-5'-一二鈉鹽(分子生物學級)  dGMP, 2'-Deoxyguanosine-5'-monophosphate di salt  質量規(guī)格：>98%，分子生物學級 動物組織氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20
小鼠結腸平滑肌細胞提取物培養(yǎng)表皮生長因子   英文名稱：   epidermal growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EGF  3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  14858-07-2  中文名：  分子式：C28H44O3 

便攜式余/總比色計   Poable  / total  colorimeter  4-(N-Methyl)-aminoantipyrine  中文名：  分子式：C12H15N3O  度：95.0%

便攜式亞鹽比色計   Poable niite colorimeic meter                 4-(N-Methyl)-aminoantipyrine  中文名：  分子式：C12H15N3O 

便攜式臭氧比色計   Poable ozone colorimeic meter  4-(Phenylthio)benzyl alcohol  6317-56-2  中文名：  分子式：C13H12OS 

半乳糖凝集素 7 （ Galectin-7 ）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Aspirin  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4  度：99.0%