大鼠表皮組織提取物培養

大鼠表皮組織提取物【Skin: Normal Rat Epidermal Derivatives】

表皮組織是由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠表皮組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

ml平底螺口離心管(國產)個/袋Benzyl carbazate53313肼基甲酸芐酯

ml圓底插口離心管(國產)25個/包 5-Benzoylpentanoic acid414425-苯甲酰基戊酸

ml圓底螺口高速離心管 PP6個/包 7-Benzyloxyindole28977-芐氧基吲哚

ml圓底內螺口離心管(國產)個/包 N-Benzylcinchonidinium chloride692574N-化辛可寧丁

mm微孔濾膜(國產，0.22μm/0.45μm)4,4'-Biphenyldicarboxylic acid784,4'-二甲酸
Catalpalactone  1585-68-8  中文名：  分子式：C15H14O4  度：%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒  

Carvedilol  72956-09-3  中文名：卡維地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒  

Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8  度：98.0%  關鍵詞：  強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠尿蛋白（UP）ELISA試劑盒           

Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林鈣  分子式：C19H18CaN2O9  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體   英文名稱：   urokinase-plasmingen activator receptor   規格：   48T/96T   英文縮寫：   uPA-R

Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他濱  分子式：C16H20FN3O7  度：98.0%      小鼠超敏感度促甲狀腺素   英文名稱：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   規格：   48T/96T   英文縮寫：   U.TSH
氯美扎酮（標準品）  Chlormezanone  質量規格：UV法溶出度檢查 小鼠內(ET)ELISA檢測試劑盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T

氫鈣（標準品）  Calcium hydrogenphosphate dihydrate  質量規格：UV法含量測定 小鼠內(ET)ELISA試劑盒 ，英文名： ET ELISA Kit

磺胺二甲嘧啶 （標準品）  Sulfamethazine  質量規格：含量測定 小鼠腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA檢測試劑盒MouseEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISAKit 96T/48T

磺胺脒（標準品）  Sulfaguanidine  質量規格：HPLC法含量測定 小鼠腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒 ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit

芬布芬（標準品）  Fenbufen  質量規格：含量測定 小鼠腺來源血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒 ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit

曲克蘆丁（標準品）  Troxerutin  質量規格：HPLC法含量測定 小鼠內磺肽α(ENSα)ELISA試劑盒 ，英文名： ENSα ELISA Kit

二羥丙茶堿（標準品）  Diprophylline  質量規格：含量測定 小鼠內凝集蛋白1(ITLN1)ELISA試劑盒 ，英文名： ITLN1 ELISA Kit

鹽酸地巴唑（標準品）  Bendazol hydrochloride  質量規格：HPLC法含量測定 小鼠內皮素1(EDN1)ELISA試劑盒 ，英文名： EDN1 ELISA Kit

氯喹（標準品）  Chloroquine diphosphate  質量規格：HPLC法含量測定 小鼠內皮素1(ET-1)ELISA試劑盒 ，英文名： ET-1 ELISA Kit

鹽酸異丙嗪（標準品）  Promethazine Hydrochloride  質量規格：含量測定 小鼠內皮素轉化酶1(ECE1)ELISA試劑盒 ，英文名： ECE1 ELISA Kit
大鼠表皮組織提取物培養蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O  度：98.0%  關鍵詞： 

蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O 

蝦胺/酚   英文名稱：   Octopamine   規格：   48T/96T   英文縮寫：   OPM  Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5  度：98.0%  關鍵詞： 

細小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8  度：98.0%  關鍵詞： 

細小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。