大鼠胎兒真皮組織提取物說明書

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大鼠胎兒真皮組織提取物【Embryo: Normal Rat Fetal Dermal Derivatives】

真皮組織位于表皮深層，向下與皮下組織相連，與后者無明顯界限。真皮由致密結締組織組成。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠胎兒真皮組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

ml擱架式離心管架N-Boc-O-Benzyl-D-serine4717N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸

ml尖底螺口離心管(Corning)25支/架 Benzoyl-DL-mine438苯甲酰基-DL-蛋氨酸

ml尖底螺口離心管(國產)支/袋Bindone175雙茚二酮

ml離心管架9-Benzylcarbazole-carboxaldehyde5411779-芐基咔唑-甲醛

ml離心管托4-Benzyloxycarbonyl-piperazinone7881854-芐氧羰基
Caspase-3,6   作用：   ELISA   規格：   96T   美國 ASSAY     Anthraquinone-1,5-disulfonic acid di salt  中文名：蒽醌-1,5-二磺酸二鈉鹽  分子式：C14H6Na2O8S2 

Calciumte,Anhydrous   500g  Annonacin  111035-65-5  中文名：  分子式：C35H64O7 

CalciumChloride,Dihydrate   500g                 Androstenone hydrazone  中文名：雄酮腙  分子式：C19H30N2O 

BromophenolBlue   50g                 Olopatadine hydrochloride  140462-76-6  中文名：鹽酸奧洛他定  分子式：C21H24ClNO3 

BromocresolPurple,FreeAcid   25g  Olopatadine hydrochloride  中文名：鹽酸奧洛他定  分子式：C21H24ClNO3
氯化熒光素(>90.0%(HPLC))  Fluorescein Chloride   質量規格：>90.0%(HPLC) 人白介素6(IL-6)試劑盒 Human IL-6 ELISA KIT

2',7'-二氯熒光素(>95.0%(HPLC))  2',7'-Dichlorofluorescein  質量規格：>95.0%(HPLC) 人白介素6受體(IL-6R)試劑盒 Human IL-6R ELISA Kit

2,3-二氨基萘(>98.0%(GC)(T))  2,3-Diaminonaphthalene  質量規格：>98.0%(GC)(T) 人白介素7(IL-7)試劑盒 Human IL-7 ELISA kit

甲菲啶(>95.0%(HPLC)(N))  Dimidium Bromide  質量規格：>95.0%(HPLC)(N) 人白介素8(IL-8/CXCL8)試劑盒 Human Ierleukin 8 ELISA KIT

7-(二甲基氨基)-4-甲基香豆素(>95.0%(GC)(T))  7-(Dimethylamino)-4-methylcoumarin  質量規格：>95.0%(GC)(T) 人白介素8(IL-8/CXCL8)自身抗體試劑盒 Human ierleukin 8 aoaibody ELISA Kit

7-(二甲基氨基)-4-三氟甲基香豆素(>97.0%(GC)(T))  7-(Dimethylamino)-4-(trifluoromethyl)coumarin  質量規格：>97.0%(GC)(T) 人白介素增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)試劑盒 Human ILF2 ELISA kit

7-(二乙基氨基)香豆素-3-羧酸(>98.0%(GC)(T))  7-(Diethylamino)coumarin-3-carboxylic Acid  質量規格：>98.0%(GC)(T) 人白三烯B4(LTB4)試劑盒 Human Leukoiene B4,LT-B4 ELISA Kit

6-[4-(二苯基氨基)苯基]香豆素-3-羧酸乙酯(>98.0%(HPLC))  Ethyl 6-[4-(Diphenylamino)phenyl]coumarin-3-carboxylate  質量規格：>98.0%(HPLC) 人白三烯C4(LTC4)試劑盒 Human Leukoiene C4,LT-C4 ELISA Kit

熒光素二鉀  Uranine K  質量規格：熒光染料 人白三烯D4(LTD4)試劑盒 Human leukoiene D4,LTD4 ELISA Kit

熒光素二乙酸酯(>98.0%(HPLC))  Fluorescein Diacetate  質量規格：>98.0%(HPLC) 人白三烯E4(LTE4)試劑盒 Human leukoiene E4,LT-E4 ELISA Kit
大鼠胎兒真皮組織提取物說明書纖維素酶（CL）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣              3-Aminoadamantan-1-ol  中文名：  分子式：C10H17NO 

纖維蛋白原（FIB）測試盒（半自動凝血儀）  Rifampicin  中文名：利福平  分子式：C43H58N4O12 

纖維蛋白原 (Fibrinogen)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝  Atorvastatin calcium  134523-03-8  中文名：阿托伐他汀鈣  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%  關鍵詞： 

纖溶酶原激活劑抑制因子2   英文名稱：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 2   規格：   48T/96T   英文縮寫：   PAI2  Aspirin  50-78-2  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4 

纖溶酶原激活劑抑制因子1   英文名稱：   Human Plasminogen Activator Inhibitor 1   規格：   48T/96T   英文縮寫：   PAI-1  Aspirin  50-78-2  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4  度：99.0%

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。