人支氣管成纖維細胞提取物培養(yǎng)

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人支氣管成纖維細胞提取物【Human Lung: Normal Bronchial Fibroblast Cell Derivatives】

人支氣管成纖維細胞提取物是從人原代支氣管成纖維細胞提取的，人原代支氣管成纖維細胞從正常人支氣管組織制備。正常人支氣管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*5/96T*2Ethyl 2-(3-cyano-isobutoxyphenyl)-methyl-thiazolecarboxylate18445

豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*5/96T*2Ethyl 2-(3-cyano-hydroxyphenyl)-methyl,3-thiazole-carboxylate1617982

豬口蹄疫病毒抗體ELISA檢測試劑盒96T*2Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-yl)methyl)amino)-nitrobenzoate1362857

弓形蟲抗原檢測試紙條卡/包，包/盒Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate1234354

貓觸珠蛋白檢測試紙條卡/包，包/盒Ethyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate9475292
Phyperunolide E  1198400-52-0  中文名：  分子式：C28H40O9    Human cardioophin 1 (CT-1) ELISA Kit 人心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒

Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7    Humanneuronalnuclearaoaibody,ANNA-1/HuELISAKit 人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Physapruin A  155178-03-3  中文名：  分子式：C28H38O7    HumanElastaseELISA試劑盒人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8    組織PDGFRβ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7    Humanpeptidoglycan,PGELISAKit人肽聚糖(PG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
竹節(jié)參皂苷V甲酯 HPLC≥95% 20mg RatGonadoopin-releasinghormonereceptor,GHRELISAKit大鼠促性腺激素釋放激素受體(GHR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

地膚子皂苷II HPLC≥95% 20mg RatGonadoopin-releasinghormonereceptor,GHRELISA試劑盒大鼠促性腺激素釋放激素受體(GHR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

地膚子皂苷Iia HPLC≥95% 20mg RatGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丹酚酸A甲酯 HPLC≥95% 20mg RatGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISA試劑盒大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

異丹酚酸C HPLC≥95% 20mg RatGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

羥基甲基蒽醌 HPLC≥95% 20mg RatGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISA試劑盒大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

羥基甲氧基蒽醌 HPLC≥95% 20mg RatgranzymesA,Gzms-AELISAKit大鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

咖啡酰奎尼酸甲酯 HPLC≥95% 20mg RatgranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒大鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氧代坡模酸 HPLC≥95% 20mg RatgranzymesB,Gzms-BELISAKit大鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

別育享賓 HPLC≥98% 20mg RatgranzymesB,Gzms-BELISA試劑盒大鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人支氣管成纖維細胞提取物培養(yǎng)Shiraiachrome A  中文名：  分子式：C30H26O10  度：%  兔損傷分子-1(rabbit Kim-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Hypocrellin A  中文名：竹紅菌甲素  分子式：C30H26O10  度：95.0%  兔瘦素(rabbit Leptin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Shikonin  中文名：紫草素  分子式：C16H16O5  度：99.0%  兔巨噬細胞炎癥蛋白-5(rabbit MIP-5)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

Triptoquinone A  中文名：  分子式：C20H24O4  度：%  兔elisa試劑盒   兔試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔試劑盒、兔elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone  中文名：  分子式：C11H7NO4  度：%  兔子層連蛋白elisa試劑盒   兔子層連蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子層連蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子層連蛋白試劑盒、兔子層連蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。