大鼠冠狀動脈內皮細胞提取物說明書

大鼠冠狀動脈內皮細胞提取物【Rat Coronary Artery：NormalCoronary Artery Derivatives】

大鼠冠狀動脈內皮細胞提取物是從大鼠原代冠狀動脈內皮細胞提取的，大鼠原代冠狀動脈內皮細胞從正常大鼠動脈組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

紅細胞裂解液1 ml2-Benzothiazolol93442-羥基苯并噻唑

激動素溶液（KT）5×1ml2-Aminothiazol-acetic acid2967612-氨基噻唑-乙酸

吉姆薩染色液 0ml 2-Aminoquinoline522-氨基

麗春紅染色液0 ml2-Aminophenyl phenyl sulfone427382-氨基二苯砜

滅菌水/去離子水0ml2-Aminophenyl phenyl sulfide113442-氨基二苯硫醚
Humanai-IVIgGaibodyELISAKit 人抗IVIgG抗體ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  1-Benzylimidazole  中文名：1-芐基咪唑  分子式：C10H10N2  度：98.0%

Humanai-IgEreceptoraibodyELISAKit 人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  1-Benzyl-5-ethoxyhydantoin  65855-02-9  中文名：1-芐基-5-乙氧基海因  分子式：C12H14N2O3  度：98.0%   

Humanai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  12-Hydroxyjasmonic acid  中文名：12-羥基酸  分子式：C12H18O4  度：95.5%

HumanAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  (1S,2R)-2-Ami,2-diphenylethanol  中文名：(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO  度：98.0%

Humanai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit 人抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝  17α-Thevebioside  中文名：  分子式：C36H56O13  度：%
頭孢匹林鈉   Cefapirin   質量規格：Content 96.0-102.0%,BR 人透明質酸酶(HAase)ELISA檢測試劑盒HumanHyaluronidase,HAaseELISAKit 96T/48T

5,7-二氯-8-羥基喹哪啶;氯喹那多  Chlorquinaldol  質量規格：>98%,BR 人褪黑素(MT)ELISA檢測試劑盒HumanMelatonin,MTELISAKit 96T/48T

癸氧喹酯;乙癸氧喹酯  Decoquinate  質量規格：>99(T) 人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒HumandeoxyribonucleaseⅠ,DNase-ⅠELISAKit 96T/48T

(S)-2-氨基-5-甲氧基四氫萘鹽酸鹽   (S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride  質量規格：>98% 人脫氧膠原交聯(DPD)ELISA檢測試劑盒HumanDeoxypyridinolinecrosslinks,DPDELISAKit 96T/48T

巴馬司他;BB94  Batimastat(BB-94)  質量規格：>98%,MMP(基質金屬蛋白酶)抑制劑 人脫氧尿三0酸(DP)ELISA檢測試劑盒Humandeoxyuridineiphate,DPELISAKit 96T/48T

伊洛馬司他(GM6001)  Ilomastat,GM6001,Galardin  質量規格：>98%,MMP(基質金屬蛋白酶)抑制劑 人唾液酸(SA)ELISA檢測試劑盒HumanSialicacid,SAELISAKit 96T/48T

愈創木酚縮水甘油醚   Guaiacol glycidyl ether  質量規格：>98% 人外顯肽(extein)ELISA檢測試劑盒HumanexteinELISAKit 96T/48T

4-氨基安替比林  4-Aminoantipyrine  質量規格：AR,分析 人晚期糖基化終末產物受體(RAGE/AGER)ELISA檢測試劑盒Humaeceptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit 96T/48T

N-代丁二(NBS)  N-bromosuccinimide  質量規格：AR 人晚期氧化蛋白產物(AOPP)ELISA檢測試劑盒Humanadvancedoxidationproteinproducts,AOPPELISAKit 96T/48T

溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶   Lysostaphin  質量規格：BR,5000U/Pack 人微管相關蛋白2(MAP-2)ELISA檢測試劑盒Humanmicrotubule-associatedprotein2,MAP-2ELISAKit 96T/48T
大鼠冠狀動脈內皮細胞提取物說明書人脂肪酶(Lipase)ELISA試劑盒              2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone  中文名：  分子式：C11H7NO4 

人脂肪分化相關蛋白(ADRP)ELISA試劑盒     2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone  103646-20-4  中文名：  分子式：C11H7NO4  度：%  關鍵詞： 

人脂多糖結合蛋白elisa試劑盒   人脂多糖結合蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   人脂多糖結合蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人脂多糖結合蛋白試劑盒、人脂多糖結合蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  2-Benzylacrylic acid  5669-19-2  中文名：  分子式：C10H10O2 

人脂多糖結合蛋白(LBP)酶聯吸附測定試劑盒   Human LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) ELISA Kit                 2-Aminophenyl phenyl sulfone  中文名：2-氨基二苯砜  分子式：C12H11NO2S 

人脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒     2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone  103646-20-4  中文名：  分子式：C11H7NO4